c-Met及c-Src蛋白在人非小细胞肺癌A549细胞系放疗前后表达及活化水平变化的研究

摘要

目的:
　　 检测人非小细胞肺癌A549细胞系在接受X线照射前以及照射后的不同时间段c-Met以及c-Src蛋白的磷酸化和非磷酸化形式表达水平不同的变化，以探讨c-Met和c-Src蛋白在非小细胞肺癌中放疗前和放疗后表达水平及磷酸化水平变化的作用及机制。
　　 方法:
　　 采用人非小细胞肺癌A549细胞系进行体外培养用以作为实验的研究对象。行Western Blot方法用以检测人非小细胞肺癌A549细胞系在接受8Gy的X线照射前以及照射后的不同时间段其c-Met及c-Src蛋白非磷酸化和磷酸化形式（即活化形态）的表达水平变化。
　　 结果:
　　 人非小细胞肺癌A549细胞系在接受8Gy的X线照射后同照射前相比较可见其磷酸化c-Met蛋白的表达程度有明显的差异，并在接受照射后2小时可达峰值，为未照射前细胞表达量的4.14±0.24倍，随后磷酸化形式c-Met蛋白的表达逐渐下降，在4小时、8小时、24小时时间段分别为放疗前的3.86±0.42倍、3.67±0.08倍以及2.31±0.10倍，放疗使得人非小细胞肺癌A549细胞系的c-Met蛋白的活化程度明显增强，但经检测非磷酸化形式的c-Met蛋白在放疗后同放疗前相比较其表达量无明显的差异，放疗后2、4、8、24小时时间点的相对表达量值分别为放疗前对照组的1.01±0.01、1.02±0.12、0.97±0.12、0.84±0.19倍;8Gy的X线照射A549细胞后，磷酸化形式的c-Src蛋白表达程度相较于接受放疗前存在明显的增加，在2小时、4小时、8小时和24小时时间段分别为放疗前A549细胞的2.32±0.03倍、2.85±0.12倍、2.41±0.12倍以及2.09±0.05倍，可见其在放疗后4小时时间段活化程度达到高峰，随后逐渐下降。放疗使得c-Src蛋白的活化程度明显增强的同时，其非磷酸化形式蛋白却在放疗后同放疗前相比表达无明显差异，A549细胞在接受放疗后2小时、4小时、8小时、24小时时间点分别为放疗前组的1.03±0.02、1.04±0.03、1.04±0.03、1.03±0.04倍。
　　 结论:
　　 在人非小细胞肺癌A549细胞系中，c-Met以及c-Src这两个原癌基因翻译后所表达的蛋白，两者的非磷酸化形式在接受照射前以及接受照射后在表达程度上均无明显差异，但其磷酸化形式的蛋白却均在相比接受放射前其表达程度有显著地增加，两者分别在照射后2小时、4小时时间点达到高峰，提示c-Met及c-Src蛋白经活化参与到了放疗后细胞信号通路的改变中，其机理可能是放疗后相关上游信号通路的活化致使c-Met及c-Src蛋白先后激活进而参与到了细胞信号传导通路中。这项实验的结果对于能够进一步了解非小细胞肺癌放疗抵抗产生的机制提供了初步的基础，并同时为c-Met及c-Src的抑制剂是否能够在临床中用于预防非小细胞肺癌放疗抵抗的产生或是抑制非小细胞肺癌的放疗抵抗提供了重要的参考价值。

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