低剂量纳曲酮对小鼠腹腔巨噬细胞功能调节的研究

摘要

前言
　　纳曲酮是一种非选择性阿片受体拮抗剂，对μ-，δ-，κ-阿片受体均有阻断作用。阿片受体是一类广泛分布于神经系统的膜受体，近年来发现阿片受体亦广泛分布于免疫细胞上，其免疫调节作用日益受到有关学者的关注。纳曲酮于1984年经FDA批准上市，以50mg/d的剂量应用于海洛因和阿片成瘾治疗。近年来，有关低剂量纳曲酮(4.5mg/d)的研究正在逐渐成为热点。自1985年起，不同研究者开展的一系列临床先导性研究表明，低剂量纳曲酮对于诸如克罗恩病、AIDS、某些肿瘤和多发性硬化症等免疫相关疾病有着潜在的治疗价值。巨噬细胞广泛存在于机体组织中，是机体重要的免疫细胞，发挥着广泛的免疫功能。经典激活巨噬细胞有吞噬杀伤，释放炎症介质，提呈抗原和调节并促进Th1型免疫的功能，可分泌较高水平的TNF-α、IL-12，以及合成大量的NO和H2O2，能有效的清除病原体和肿瘤细胞。腹腔巨噬细胞多游离存在于腹腔的腹水中，易于获得，因此进行体外实验时往往选用小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象。目前关于低剂量纳曲酮对小鼠腹腔巨噬细胞是否存在活化作用，以及不同浓度的低剂量纳曲酮对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节是否存在差异这些方面的研究，国内外未见报道。本研究利用体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞，给予不同浓度的低剂量纳曲酮刺激，通过酶联免疫吸附试验等检测手段，检测相关指标并做出统计分析，旨在为后续的实验室和临床研究提供一些参考。
　　方法
　　所用实验动物为清洁级6-8周龄雌性BALB/c小鼠，无菌灌洗提取腹腔巨噬细胞，贴壁纯化培养，鉴定合格后用于后续实验。预实验通过比对各浓度低剂量纳曲酮刺激下巨噬细胞培养上清中NO水平确定低剂量纳曲酮作用于小鼠腹腔巨噬细胞的适宜浓度和作用时间;正式实验在适宜浓度和作用时间下收集细胞培养上清，利用一系列试剂盒检测相关指标并做统计分析。
　　结果
　　1、无菌灌洗提取腹腔细胞，贴壁纯化培养，经台盼蓝染色鉴定细胞存活率＞99％，瑞氏-姬姆萨染色鉴定巨噬细胞纯度＞98％。
　　2、10-8M的低剂量纳曲酮处理组96h培养上清中H2O2的含量与空白对照组比较显著升高(P＜0.01)。
　　3、10-8M的低剂量纳曲酮处理组96h培养上清中NO的含量与空白对照组比较显著升高(P＜0.01)。
　　4、10-8M的低剂量纳曲酮处理组96h培养上清中TNF-α的含量与空白对照组比较显著升高(P＜0.01)。
　　5、10-8M的低剂量纳曲酮处理组96h培养上清中IL-12p70的含量与空白对照组比较显著升高(P＜0.01)。
　　结论
　　1.低剂量纳曲酮对体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞的功能存在活化作用，且不同浓度的低剂量纳曲酮对巨噬细胞的功能活化程度不同。
　　2.10-8M的低剂量纳曲酮作用96小时，可以显著地促进体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞产生NO，H2O2等活性物质。
　　3.10-8M的低剂量纳曲酮作用96小时，可以显著地促进体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、IL-12等促炎性细胞因子。

目录

声明

摘要

英文缩略语

前言

材料与方法

实验结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 纳曲酮对免疫系统的影响及其临床应用

在学期间科研成绩

致谢

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