蛋氨酸脑啡肽联合低剂量纳曲酮治疗胰腺癌作用的研究

摘要

胰腺癌是一种恶性程度极高的消化系统恶性肿瘤，其发病隐匿，进展快，预后差，大约80％的患者确诊时往往伴有局部的侵犯或者转移，5年生存4％，胰腺癌的临床治疗主要以外科手术治疗，放化疗为主。蛋氨酸脑啡肽（methionine-enkephalin，MENK）是1975年Hughes等从猪脑提取液中分离出来具有内源性吗啡样活性的物质，人们发现其受体在免疫细胞以及某些肿瘤组织和正常组织细胞均有分布，MENK通过与免疫细胞上受体结合发挥免疫调节作用，通过与肿瘤细胞上的受体结合发挥抑制肿瘤的作用。纳曲酮(naltrexone，NTX)是美国杜邦公司1963年合成并研究开发的一种非选择性阿片受体拮抗剂，能阻断阿片类物质与阿片受体结合，人们发现间断性的给予NTX6-8小时后，会出现一个18小时到72小时的窗口期，在窗口期内，肿瘤细胞受到抑制。与此同时，NTX在低剂量时具有免疫调节作用。因此，基于MENK与NTX直接抗肿瘤作用与激活免疫细胞间接抗肿瘤作用，本文将MENK与NTX联合应用，进行荷瘤小鼠的体内外试验，通过对不同给药剂量以及不同给药时间的研究，从直接抗肿瘤与激活免疫系统间接抗肿瘤两个角度进行研究，探讨MENK与NTX联合使用治疗胰腺癌的可行性，为肿瘤临床治疗提供新的途径。
　　实验目的：
　　通过单独应用MENK、NTX与联合应用MENK与NTX的体内外实验，探讨MENK、NTX及二者联合时对胰腺癌的抑制作用。
　　实验方法：
　　1.体外实验中，MTS方法检测各实验组中胰腺癌增殖细胞的抑制情况;
　　2.体内实验中，通过建立胰腺癌荷瘤小鼠模型，检测各实验处理组中胰腺癌的抑制情况。
　　3.WB法检测荷瘤小鼠胰腺癌组织阿片受体蛋白表达量;
　　4.流式细胞术检测荷瘤小鼠淋巴细胞亚群（CLT、Treg、NK、γδT）的增殖情况。
　　实验结果：
　　1.在体外实验中，MENK在浓度为10-6M时对胰腺癌细胞的抑制作用最强;NTX在浓度为10-5M时对胰腺癌细胞的抑制作用最强;二者相比较，MENK的作用更加显著，具有统计学意义;
　　2.在体内实验中，MENK与NTX联合应用在48小时后与对照组相比较，具有统计学意义，在96小时与MENK组与NTX组相比较抑癌率升高，具有统计学意义;
　　3.在体内实验中，在1次/24h的给药方式下， MENK在剂量为20mg/kg时抑癌效果最显著;NTX在剂量为5mg/kg时抑癌效果最显著;MENK组与NTX组相比较作用更加显著，具有统计学意义;
　　4.MENK与NTX联合应用时，MENK在剂量为20mg/kg/1次/24h与NTX在剂量为5mg/kg/1次/96h给药方式时，抑癌效果最显著，与对照组相比具有统计学意义;
　　5.Western-blot技术检测荷瘤小鼠肿瘤组织阿片受体的蛋白的表达含量
　　NTX组与MENK+NTX组肿瘤组织阿片受体蛋白表达量增加， NTX组高于MENK+NTX组，具有统计学意义;
　　6.流式细胞技术检测荷瘤小鼠淋巴细胞亚群增殖情况
　　MENK组、NTX组与MENK+NTX组都可以促进淋巴细胞亚群(CTL、NK、γδT)增殖，抑制Treg增殖，与对照组相比具有统计学意义;
　　实验结论：
　　1、MENK在体内外能够抑制胰腺癌细胞增殖，NTX在体内外能够抑制胰腺癌细胞增殖，两者相比MENK作用更加显著;
　　2、MENK与NTX联合应用，在NTX给药72小时后具有协同作用
　　3、NTX在体内能够上调肿瘤组织阿片受体的蛋白表达;
　　4、MENK在体内能够促进CTL、NK、γδT细胞的增殖，抑制Treg细胞的增殖;NTX在体内能够促进CTL、NK、γδT细胞的增殖，抑制Treg细胞的增殖;二者联合具有协同作用。

目录

声明

摘要

英文缩略语

前言

实验材料和方法

一、实验动物与细胞

二、主要试剂

三、实验仪嚣

四、实验方法

五、实验结果

六、讨论

七、结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 蛋氨酸脑啡肽和纳曲酮的研究进展

致谢

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