核糖核苷酸还原酶M1亚单位基因单核苷酸多态性与胰腺癌吉西他滨化疗敏感性的关系

摘要

背景
　　胰腺癌是消化系统常见恶性肿瘤，其发病隐匿、进展迅速、治疗效果及预后极差，居全球癌症死因第5位。吉西他滨是胰腺癌治疗的一线化疗药物，但由于患者的个体间差异及耐药性，常导致治疗效果不佳。
　　核糖核苷酸还原酶M1亚单位（ribonucleotidereductaselargesubunit1，RRM1）是核糖核苷酸还原酶(ribonucleotidereductase，RR)的催化亚基，是吉西他滨的主要作用位点。已有多个实验证实患者对吉西他滨的反应随着RRM1表达水平的升高而下降。单核苷酸多态性（singlenucleotidepolymorphism，SNP）是人类基因组中最丰富的遗传变异，指基因组DNA序列中频率大于1％的单个核苷酸的变异。现已证实RRM1基因SNP可能改变代谢酶活性与产量，导致患者对吉西他滨的不同反应。随着人类基因组研究(HumanGenomeProject,HGP)的完成和国际人类基因组单体型图计划(InternationalHapMapProject，HapMap)的进展，利用SNP预测患者预后的研究已切实可行。
　　第一部分RRM1基因多态性与胰腺癌根治术后吉西他滨化疗患者预后关系的临床研究
　　方法
　　研究对象包括35例成功随访的经病理组织学确诊的胰腺癌病例和38例按性别和年龄与病例进行频数匹配的健康人群对照。探讨RRM1基因多态性改变与胰腺癌预后之间的关联。采用功能SNP的选点策略，共选择了RRM1基因四个多态性位点(rs1042858A＞G、rs183484G＞T和rs9937A＞G、rs11030918T＞C)，采用高通量技术进行基因型检测，采用SPSS18.0软件行Kaplan-Meier方法绘制生存曲线并以Log-rank检验生存时间之间的差异。单因素和多因素Cox回归计算相对危险度(RelativeRatios,RR)。
　　结果
　　rs183484GG基因型患者的中位生存时间明显长于GT/TT型患者(log-rankp=0.028)。单因素回归分析结果显示，与rs183484GG基因型携带者相比，GT/TT基因型患者死亡风险显著提高3.03倍(RR=0.303，95％CI=0.10-0.93，P=0.037)。进一步进行多因素调整后，GG基因型仍具有较好的预后效应(调整RR=0.254，95％CI=0.08-0.83)。以上结果说明rs183484GG基因型是术后吉西他滨化疗胰腺癌患者良好预后的独立预测因素。分层分析表明在男性及淋巴结转移的患者中，rs183484位点的多态性改变与胰腺癌患者的预后之间也存在显著的统计学关联(调整RR=0.282，95％CI=0.032-1.04;调整RR=0.317，95％CI=0.14-1.004)。研究还发现rs9937位点AA基因型患者的生存时间长于AG/GG基因型患者，但差异未达到统计学显著性水平(log-rankP=0.066，RR=0.543，95％CI=0.17-1.77，P=0.311)。rs183484与rs9937位点的联合分析结果表明，死亡风险随着携带预后不良基因型个数的增加而增加，携带两个预后不良基因患者的死亡风险约为未携带预后不良基因型的患者的2.29倍(RR=2.288，95％CI=0.942-5.558，P=0.068)。
　　结论
　　RRM1基因多态性改变与胰腺癌根治术后吉西他滨化疗患者的预后有关，rs183484GG基因型是术后吉西他滨化疗胰腺癌患者良好预后的预测因素。这可能与该基因影响化疗药物介导的DNA损伤后修复有关。
　　第二部分RRM1基因多态性在各胰腺癌细胞株中的分析及与其mRNA表达关系的研究
　　方法
　　本研究使用人胰腺癌细胞株Aspc、Bxpc、SU86.86、SW1990、T3M4、Mia、PCT，利用KingFisherDuo磁珠纯化系统提取细胞株DNA，PCR扩增目的片段后使用ABI3730XL基因分析仪进行RRM1基因多态性分析。同时使用KingFisherDuo磁珠纯化系统提取细胞株RNA，采用SYBRGreen荧光染料法qRT-PCR检测胰腺癌细胞株RRM1mRNA的表达水平。
　　结果
　　rs183484位点不同基因型胰腺癌细胞株RRM1mRNA表达水平显著不同(p=0.018)，GG基因型的胰腺癌细胞株RRM1mRNA明显低于GT/TT基因型的胰腺癌细胞株。
　　结论
　　RRM1基因多态性可以改变RRM1基因的表达水平。rs183484GG基因型的胰腺癌细胞株RRM1mRNA的表达低于其他基因型细胞株。

目录

声明

摘要

英文缩略语

第一部分 RRM1基因多态性与胰腺癌根治术后吉西他滨化疗患者预后关系的临床研究

前言

临床资料与方法

结果

讨论

第二部分 RRM1基因多态性在各胰腺癌细胞株中的分析及与其mRNA表达关系的研究

前言

材料与方法

结果

讨论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 吉西他滨代谢酶单核苷酸多态性在胰腺癌治疗中的作用

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致谢

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