褪黑素减轻大鼠DCD肝移植术后ERS相关损伤的实验研究

摘要

实验目的：
　　目前肝移植已经成为治疗终末期肝病的常规手术。移植后多种因素能够导致移植肝损伤，其中肝脏缺血再灌注损伤(Ischemia-reperfusion injury，IRI)是导致移植肝早期无功能及急、慢性排斥反应的重要原因。而心脏死亡供体(donation aftercardiac death，DCD)供肝不可避免地要经历一段热缺血损伤，使肝脏对于IRI更加敏感，更大的加剧了移植后肝细胞损伤，更容易出现移植后肝脏无功能和胆道损伤。近年来研究表明内质网应激（Endoplasmic reticulurn stress，ERS）及其介导的细胞凋亡在器官移植后缺血再灌注、慢性缺血、炎性反应等损伤中起到重要作用。褪黑素(melatonin，MEL)是松果腺分泌的一种神经内分泌激素，具有对生物的昼夜节律、性成熟及生殖、衰老、免疫反应、肿瘤、氧化应激等均有调节作用，因其广泛的病理生理功能及低毒副作用而受到广泛的关注。本研究拟采用大鼠DCD原位肝移植模型，探讨肝移植大鼠肝组织ERS相关分子GRP-78及CHOP表达，以及MEL对GRP-78及CHOP表达的影响，及MEL对移植肝的保护作用。
　　材料方法：
　　采用“磁环法”建立大鼠原位肝移植模型。采用剪破膈肌诱导气胸并钳夹心脏基底部诱导心脏停跳，热缺血30分钟后获取供肝，模拟心脏死亡供体以建立大鼠DCD原位肝移植模型。
　　供受体均采用健康清洁SD雄性大鼠，分为假手术组（Sham组），原位肝移植组(OLT组)，原位肝移植+褪黑素处理组(OLT+MEL组)，DCD原位肝移植组（DCD组），DCD原位肝移植组+褪黑素处理组(DCD+MEL组)，每组各8只。大鼠于手术处理24h后麻醉处死，留取下腔静脉血检测血清ALT及AST水平，取肝脏组织标本，应用RT-PCR方法检测GRP-78及CHOP mRNA表达，应用WesternBlot方法检测GRP-78及CHOP蛋白表达情况及HE染色方法评估肝脏损伤程度。
　　实验结果：
　　1、GRP-78及CHOP mRNA在肝脏组织中的表达
　　与Sham组相比，OLT组肝组织GRP-78及CHOP的mRNA水平表达明显增高(P＜0.01);与OLT组相比，OLT+MEL组GRP-78及CHOP的mRNA水平表达减少(P＜0.05);与OLT组相比，DCD组GRP-78及CHOP的mRNA水平表达明显增高(P＜0.01);与DCD组相比，DCD+MLT组GRP-78及CHOP的mRNA水平表达减少(P＜0.05)。其差异具有统计学意义。
　　2、GRP-78及CHOP蛋白在肝脏组织中的表达
　　与Sham组相比，OLT组肝组织GRP-78及CHOP的蛋白水平表达明显增高(P＜0.01);与OLT组相比，OLT+MEL组GRP-78及CHOP的蛋白水平表达减少(P＜0.05);与OLT组相比，DCD组GRP-78及CHOP的蛋白水平表达明显增高(P＜0.01);与DCD组相比，DCD+MLT组GRP-78及CHOP的蛋白水平表达减少(P＜0.05)。其差异具有统计学意义。
　　3、肝功能检测
　　血清ALT及AST水平是反应肝脏功能受损程度的重要指标。与Sham组相比，OLT组血清ALT及AST水平显著升高(P＜0.01);与OLT组相比，OLT+MEL组血清ALT及AST水平明显下降(P＜0.05);与OLT组相比，DCD组血清ALT及AST水平明显增高(P＜0.01);与DCD组相比，DCD+MLT组血清ALT及AST水平减少(P＜0.05)。其差异具有统计学意义。
　　4、肝脏病理变化
　　Sham组HE染色基本同正常肝脏组织，肝小叶结构完整，肝索排列有序，未见肝细胞水肿变性及肝细胞凋亡和坏死等现象。OLT组HE染色可见肝索排列紊乱，肝细胞水肿气球样变明显，肝窦内皮细胞肿胀明显，有单个肝细胞出现细胞皱缩，嗜酸，核固缩。OLT+MEL组HE染色可见肝索排列紊乱程度减轻，肝细胞水肿减轻，未见明显细胞凋亡坏死。DCD组HE染色可见肝索排列紊乱，肝细胞水肿气球样变明显，肝窦内皮细胞肿胀明显，可见汇管区塌陷，明显坏死灶，损伤较OLT组明显加重。DCD+MLT组肝索排列紊乱程度及肝细胞水肿较DCD组稍减轻，坏死灶减轻变小。
　　实验结论：
　　ERS参与了肝移植术后的病理过程，且DCD供肝移植后的表现更为强烈。褪黑素能够减轻大鼠肝移植术后ERS相关损伤，对移植肝起到保护作用。

目录

声明

摘要

英文缩略语

前言

实验材料与方法

实验结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 ERS介导的细胞凋亡与肝移植缺血再灌注损伤

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