不同液体容量复苏对内毒素血症大鼠肺毛细血管内皮细胞水通道蛋白1表达的影响

摘要

目的:
　　评价不同液体复苏对内毒素血症大鼠肺毛细血管内皮细胞水通道蛋白1(AQP-1)表达的影响。
　　方法:
　　健康清洁级雄性SD大鼠40只，体重250～300 g，6～8周龄。采用随机数字表法，将其分为4组(n=10):空白对照组（C组）、氯化钠复苏组(NS组)、6％羟乙基淀粉130/0.4复苏组（HES组）和高渗氯化钠羟乙基淀粉40复苏组（HSH组）。用10％水合氯醛，按5ml/kg腹腔注射进行麻醉。常规备皮消毒后做气管切开，保留自主呼吸，行面罩吸氧，氧浓度为60％，流量为2L/min。分离一侧股动、静脉，分别留置22G套管针。股动脉用于连接监护仪监测平均动脉压和采集血样，股静脉用于补液。于股静脉缓慢注射LPS（Sigma公司，美国）按5mg/kg溶于0.5ml生理盐水中制备脓毒症模型。于造模10 min后，经股静脉注入各组所对应的液体，以15 ml/kg恒速输注6h。于造模后即刻、3、6h时采集股动脉血样，行血气分析，记录PaO2和乳酸(Lac)浓度，计算氧合指数。同时4℃下3000×g离心10min,取上清于无菌试管内-80℃保存。余步骤按照ELISA试剂盒(Cloud-clone公司，美国)操作说明，检测血清TNF-α浓度。造模6h处死大鼠取肺组织，结扎左主支气管取出左肺。用滤纸轻轻擦拭肺组织表面液体，用分析天平称量肺组织湿重，送至80℃烤箱烘烤48h后取出，称量肺组织干重，计算肺湿干重比(W/D)。取出左肺后迅速用4％多聚甲醛快速内、外固定右肺上叶，浸泡24h后制成蜡块。采用免疫组化SP法，切片经常规脱蜡、脱水后，用3％过氧化氢灭活内源性氧化酶，高压修复后，余步骤按试剂盒（Santacruz公司，美国）说明书进行检测AQP-1表达情况。用已知阳性片作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照，AQP-1抗体稀释浓度为1∶500。肺泡周围毛细血管内皮细胞呈棕黄色染色者为阳性表达。另取一部分右肺上叶石蜡包埋后切片、制片。HE染色后，用光镜观察肺组织病理学结构并进行评分。肺组织损伤评分内容为肺萎陷、肺泡壁透明膜形成、中性粒细胞浸润或聚集，肺泡内充血或出血，分别依其严重程度分为0-4级。用SPSS19.0统计学软件进行分析，计量资料以均数±标准差((x)±s)表示，采用单因素方差分析(ANOVA)，P＜0.05为差异有统计学意义。
　　结果:
　　与C组比较，NS组、HES组和HSH组W/D比值、血清TNF-α、Lac浓度、肺损伤评分升高，AQP-1表达下调，PaO2和氧合指数降低(P＜0.05)。与NS组比较，HES组和HSH组W/D比值、血清TNF-α、Lac浓度、肺损伤评分降低，AQP-1表达上调，PaO2和氧合指数升高（P＜0.05）。与HES组比较，HSH组血Lac浓度降低(P＜0.01)，其余指标差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　结论:
　　6％羟乙基淀粉130/0.4溶液和高渗氯化钠羟乙基淀粉40溶液容量复苏可有效减轻内毒素血症大鼠急性肺损伤，且高渗氯化钠羟乙基淀粉40的效果更显著，其机制与上调肺毛细血管内皮细胞的AQP-1表达有关。

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结论

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综述 容量复苏对内毒素血症性肺损伤影响的研究进展

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