钙蛋白酶抑制剂MDL28170抑制腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚进程的研究

摘要

目的:
　　长期持续的心肌肥厚将导致心肌病，心衰，甚至猝死等。研究心肌肥厚发生发展的机制，对临床治疗、改善预后意义重大。目前大量研究表明，作为钙敏感的信号物质，钙蛋白酶calpain与心肌肥厚关系密切。calpain的活性可影响诸多与心肌肥厚、重构有关的信号通路:例如通过水解钙调神经磷酸酶(calcineurin，CaN)生成其活性片段和水解CaN的内源性抑制剂Cain/Cabin1激活CaN信号通路以及通过降解胞质中与核因子-κB(nuclear factor-kappa B，NF-κdB)结合的抑制因子IκBα，从而激活NF-kB信号通路等。本研究通过动物实验模拟心肌肥厚发生发展的过程，观察其对动物心功能及一般情况的影响，进一步使用新型药物钙蛋白酶抑制剂MDL28170进行干预，观察该种药物对增加心脏后负荷导致的心肌肥厚是否有阻遏、逆转作用，治疗效果如何，是否有临床应用价值。
　　方法:
　　280-350g成年雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、假手术组、手术组、手术+治疗组。其中手术组及手术+治疗组予施行腹主动脉结扎缩窄术，假手术组只绕线不结扎，正常对照组不予处理。术后正常饲养至4周行第一次心脏彩超检查，记录舒张末期室间隔厚度(interventricular septum thickness at end-diastole，IVSTd)、左室舒末内径(left ventricular end-diastolic diameter, LVEDD)、舒张末期左室后壁厚度(left ventricular posterior wall thickness at end-diastole，LVPWTd)、左室舒张末期容积(left ventricular end-diastolic volume，LVEDV)、左室收缩末期容积(leftventricular end-systolic volume，LVESV)、短轴缩短率(left ventricular fractionalshortening，LVFS)、射血分数（left ventricular ejection fraction，LVEF）等指标;判断大鼠术后心肌肥厚情况。并开始药物干预:手术+治疗组大鼠给予MDL28170治疗，采用每日腹腔注射的给药方式，注射剂量20mg/kg.d，连续用药2周。其余3组大鼠同时给予等量生理盐水。6周行第二次心脏彩超检查，具体步骤同前一次。记录各组大鼠的数据，同前次比较手术组大鼠的心肌肥厚进展情况，以及手术+治疗组大鼠的心肌肥厚情况是否得到改善。所有大鼠称重记录后麻醉、开胸、取心脏，称重记录。计算各组大鼠心脏质量与体重的比值。Western Blot法检测心脏标本中calpain1、calpain2、CaN A的表达情况。
　　结果:
　　1、4周后手术组及手术+治疗组大鼠心肌肥厚模型建立成功，体现在彩超下可见舒张末期室间隔、左室后壁较正常对照组及假手术组明显增厚，差距有统计学意义(p＜0.05)。
　　2、药物干预后，手术+治疗组动物心肌肥厚情况得到控制，进展延缓。6周末，心脏彩超提示手术组心肌肥厚情况进一步加重，而手术+治疗组较4周时仍略有加重，但两组显现明显差距，有统计学意义(p＜0.05)。
　　3、手术组、手术+治疗组大鼠心脏质量、心重指数较另外2组增加明显，其中尤以手术组更为严重，两组之间的差异有统计学意义(p＜0.05)。
　　4、Western Blot法检测calpain1、calpain2、CaNA在手术组表达量增加明显，手术+治疗组表达量降低，两者之间的差异有统计学意义(p＜0.05)。在手术组，三种目的蛋白的表达量为calpain1＞CaN A＞calpain2。
　　结论:
　　钙蛋白酶calpain与心肌肥厚关系密切，CaN途径是其作用机制之一;钙蛋白酶抑制剂MDL28170对实验条件下的心肌肥厚具有明显阻遏作用。

目录

声明

摘要

英文缩略语

前言

材料与方法

一、实验材料

二、实验方法

三、统计分析

结果

一、实验动物生存情况分析

二、各组大鼠一般情况及体重、心重、心重指数比较

三、心脏彩超测定大鼠心肌肥厚情况及左心功能

四、Western Blot半定量检测相关蛋白表达情况

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 钙蛋白酶Calpain与心肌肥厚的关系探讨

致谢

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