维生素D类似物对小鼠急性肺水肿的保护作用及相关机制研究

摘要

由于各种原因而导致异常的液体积贮于肺间质或肺泡内，此时的病症称为急性肺水肿，它的临床症状主要表现为呼吸困难。肺泡上皮细胞可以发挥两个作用，一是可以促进分泌肺泡表面活性物质，二是可以主动转运Na+，增进肺泡腔内的液体向细胞间隙运输，进而促进液体的吸收。因此，肺泡正常功能的发挥与肺泡上皮细胞之间有着十分重要的关联。近些年来人们发现维生素D不仅可以参与抑制炎症反应的发生、增殖和修复肺上皮细胞，它也可以通过调控小鼠肺组织的上皮钠通道(epithelial sodium channel，ENaC)的活性而提高小鼠肺脏内液体清除，但目前尚无实验证实维生素D类似物对急性肺水肿的具体机制。因此，深入研究ENaC功能活动及炎症反应对于减轻肺水肿有着十分必要的临床意义。本实验旨在探讨维生素D类似物与小鼠急性肺水肿之间的关系，以及ENaC表达与炎症因子的释放在其中的介导作用，以明确其在急性肺水肿中的作用机制。
　　目的：
　　一、探讨维生素D类似物对急性肺水肿小鼠生存时间、肺组织病理学变化的影响。
　　二、检测维生素D对急性肺水肿小鼠的肺湿干重比、心肺系数及肺指数的影响。
　　三、检测维生素D类似物对急性肺水肿小鼠肺组织ENaC的mRNA和蛋白水半表达的影响。
　　四、检测维生素D类似物对急性肿水肿小鼠炎症因子的影响。
　　方法：
　　一、选择健康雄性BALB/c小鼠28只，随机数字表法分为对照(Control)组、帕立骨化醇(paricalcitol，Pari)组、脂多糖(lipopolysaccharides，LPS)组、LPS+Pari组，每组各7只。四组小鼠预处理14天，其中Control组和LPS组小鼠每隔一天进行腹腔注射给药200 ng/kg的溶媒1，2丙二醇(1，2-propanediol，PE);Pari组和LPS+Pari组两组小鼠每隔一天进行腹腔注射给药200 ng/kg的Pari（活性维生素D类似物）。第14天，用15 mg/kg的LPS给药LPS组和LPS+Pari组;0.9％NaCl，15 mg/kg给药Control组和Pari组。分析各组小鼠生存时间，观察小鼠肺组织湿干重比，心肺系数及肺指数。
　　二、肺组织切片应用苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining，HE)法观察肺组织形态学变化。
　　三、采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCT)的方法和免疫印迹(western blot，WB)法检测维生素D类似物对α-ENaC，γ-ENaC的mRNA及蛋白水平的影响。
　　四、应用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)的方法检测血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）的水平，以及髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)的活性。
　　结果：
　　一、维生素D类似物能够延长急性肺水肿小鼠的生存时间(P＜0.05)，肺泡间隔减小，炎症程度减轻，病理损伤改善。
　　二、维生素D类似物预处理的急性肺水肿相对于PE预处理的对照急性肺水肿小鼠湿干重比、心肺系数及肺指数降低。
　　三、维生素D类似物能够增加急性肺水肿小鼠肺组织中α-ENaC和γ-ENaC的mRNA及蛋白的表达(P＜0.05)。
　　四、维生素D类似物能够使急性肺水肿小鼠血清中TNF-α、IL-6水平，MPO的活性均有所降低(P＜0.05)。
　　结论：
　　一、维生素D类似物能够缓解急性肺水肿小鼠的病理改变，其机制可能与减少炎症因子释放有关。
　　二、维生素D类似物可能通过增加ENaC的α-亚基和γ-亚基的表达来减轻急性肺水肿的症状。

目录

声明

摘要

二、英文缩略语

前言

实验材料与方法

实验结果

讨论

结论

四、本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 维生素D对肺内疾病的作用研究

在学期间科研成绩

致谢

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