MBL2-4:3在喉癌组织中的表达及对喉癌Hep-2细胞系生物学行为影响

摘要

目的:
　　喉癌在头颈部恶性肿瘤中比较常见，发病率有不断增长的趋势，在我国，以华北、东北地区高发。虽然喉癌的诊疗技术有了很大提升，但喉癌患者总体5年生存率至今仍无显著改善，其发生发展及预后的众多分子机制尚未明确。因此，从分子水平上探索喉癌发生发展的机制对于喉癌的诊治有着重要的意义。长非编码RNA(LncRNA)是指一类长度超过200个核苷酸并且没有蛋白质编码功能的非编码RNA。主要通过表观遗传水平、转录以及转录后水平三个层面参与基因表达调控，从而参与机体的生长、发育、衰老、疾病等生理病理过程。近年来研究发现，长链非编码RNA作为促癌或者抑癌基因参与肿瘤的发生、发展，而且与肿瘤细胞的增殖、凋亡、转移和细胞周期改变等生物学行为密切相关。既往有研究发现lncRNA与头颈部肿瘤有一定关系，但与喉癌相关的lncRNA的研究较少。已有研究初步表明，MBL2-4∶3在一些头颈部鳞癌中发挥着促癌作用，但具体发生机制还不清楚，其在喉癌中的作用亦不知道。本实验主要探讨MBL2-4∶3在喉鳞癌组织里是否有差异表达，进而在离体的喉鳞癌Hep-2细胞系内研究MBL2-4∶3对其生物学功能的影响。
　　方法:
　　本研究通过荧光实时定量PCR来检测30例喉癌组织和癌旁组织内MBL2-4∶3的表达水平;采用RNA干扰技术，用siRNA瞬时转染喉癌细胞，实验一共分三组。转染siMBL2-4∶3的Hep-2细胞为实验组，没有任何干预的Hep-2细胞作为空白对照组（untreated组），转染NC的Hep-2细胞作为阴性对照组，应用qPCR法检测每组Hep-2细胞里MBL2-4∶3的表达量;采用CCK-8和克隆形成实验观察siMBL2-4∶3对喉鳞癌Hep-2细胞系增殖能力的影响，流式细胞术检测siMBL2-4∶3对Hep-2细胞凋亡及细胞周期的影响，划痕实验和Transwell研究 siMBL2-4∶3对Hep-2细胞迁移水平的影响。
　　结果:
　　1、荧光实时定量PCR结果显示:与相应的癌旁组织做比较，喉癌组织里MBL2-4∶3的表达量增多，且在喉癌Hep-2细胞中MBL2-4∶3的表达量明显高于HEK293细胞系，统计学差异显著（P＜0.05)。
　　2、荧光实时定量PCR检测转染效率:MBL2-4∶3在转染siMBL2-4∶3的喉癌Hep-2细胞系（实验组）、转染NC的Hep-2细胞系（阴性对照组）及未做任何干预的untreated组（空白对照组）的比较有差异表达，相对表达量有统计学意义(P＜0.05)。
　　3、CCK-8结果显示:将喉癌Hep-2细胞进行瞬转，36h后实验组Hep-2细胞的OD值与阴性对照组和空白对照组Hep-2细胞相比存在明显差异，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　4、克隆实验结果显示:与对照组相比，转染siMBL2-4∶3的实验组可以显著的抑制喉癌Hep-2细胞的增殖(P＜0.05)。
　　5、流式细胞术结果:相比于阴性对照组和空白对照组，转染siMBL2-4∶3的实验组对喉癌Hep-2细胞的凋亡无明显影响，(P＞0.05)，敲低MBL2-4∶3可诱导喉癌Hep-2细胞周期S期阻滞(P＜0.05）。
　　6、划痕试验和Transwell实验结果显示:转染siMBL2-4∶3的实验组于阴性对照组和空白对照组相比，可以显著抑制喉癌Hep-2细胞的迁移能力(P＜0.05）。
　　结论:
　　MBL2-4∶3在喉癌组织里的表达显著高于相应的癌旁组织，在喉鳞癌细胞系Hep-2细胞中的表达高于人胚肾细胞系HEK293。对喉癌细胞系Hep-2细胞进行MBL2-4∶3敲减后可使喉癌Hep-2细胞的增殖和迁移能力等恶性生物学行为受到抑制，还可诱导喉癌Hep-2细胞周期S期阻滞，但MBL2-4∶3的低表达不影响喉鳞癌Hep-2细胞的凋亡。

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摘要

英文缩略语

前言

材料与方法

实验结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 长链非编码RNA与基因表达调控

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