脂肪干细胞条件培养基促进UVB损伤相关HDFs内Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的研究

摘要

研究背景:长期的紫外线作用会破坏皮肤屏障，使皮肤出现结构功能的改变和衰老样外观。脂肪干细胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)作为一种成体基质干细胞，具有多胚层、多谱系分化潜能，可分泌多种促生长因子进而调控邻近受损细胞，研究表明脂肪干细胞条件培养基(adipose-derived stemcell-conditioned medium，ADSC-CM)可在一定程度上修复紫外损伤，刺激蛋白的合成，本研究对ADSC-CM促进UVB损伤后相关胶原蛋白表达的作用进行更加深入地研究，在蛋白层面为ADSCs的研究提供依据。
　　实验目的:通过比较UVB照射后经ADSC-CM处理和未经ADSC-CM处理的HDFs中胶原蛋白表达量随培养时间的变化情况，探究UVB照射对HDFs内Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的损伤效应及ADSC-CM对UVB损伤后HDFs内Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的促进作用与处理时间和细胞代数的关联性。
　　实验方法:1.体外培养获取不同代数的HDFs;2.提取ADSCs进行细胞培养和鉴定，制备ADSC-CM;3.UVB照射不同代数HDFs，用适宜浓度的DMEM及ADSC-CM分别培养UVB损伤后的HDFs，设对照组，于培养24h，48h，72h后提取蛋白;4.检测各组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达量。
　　实验结果:UVB组P5、P15 HDFs中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达量随照射后培养时间延长而降低，P28蛋白表达量趋近于零，各时间点无统计学差异;UVB+ADSC-CM组P5、P15 HDFs中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达量在一定范围内随处理时间延长而增加，48h最明显，而后呈下降趋势，但P28各时间点的蛋白表达量无统计学差异。
　　实验结论:UVB加速HDFs衰老、抑制Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白表达的损伤效应仅在年轻HDFs中具有时间相关性;ADSC-CM会促进光老化HDFs中Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白表达，但该修复效果受处理时间限制，只在一定范围内随处理时间延长而增强，且仅限于年轻的细胞，对于年老的细胞不再具有时间相关性。

目录

声明

摘要

英文缩略语

1 前言

2．1．1 试剂

2．1．2 主要仪器

2．2 实验方法

2．2．1 人HDFs的体外培养

2．2．2 ADSCs的分离提取及原代培养

2．2．3 ADSCs成骨成脂化诱导及免疫表型鉴定

2．2．5 UVB照射及ADSC-CM处理

2．2．6 蛋白提取和浓度测定

2．2．7 蛋白印迹(Western Blot，WB)

2．2．8 结果分析与统计学分析

3．1 ADSCs培养

3．2 ADSCs鉴定结果

3．3 Western blot结果

3．3．1 第5代HDFs中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达western blot结果

3．3．2 第15代HDFs中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达western blot结果

3．3．3 第28代HDFs中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达western blot结果

4 讨论

5 结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 脂肪干细胞抗皮肤老化的研究及应用进展

致谢

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