碱蓬内生细菌的分离鉴定及抑菌活性研究

摘要

植物内生细菌(endophytic bacteria)是指能在健康植物组织内栖居而对植物不造成实质性危害并与植物建立了和谐联合关系的微生物。近年来的研究证明，植物内生菌具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化等生物学活性，作为特殊的微生物资源-植物内生菌及其代谢产物已成为研究和发现新的天然药物和生物活性成分的重要资源库，是微生物研究领域的热点方向之一。
　　 碱蓬(Suaeda glauca bge)生长于盐渍化土壤、湖滨、河岸和沿海地带，是典型的盐碱地指示植物，也是植物耐盐基因研究的重要模式材料。生活环境的特殊性使其内生菌的生理和代谢可能呈现出与一般微生物不同的特征。本试验选择盐生植物碱蓬作为抗菌内生菌的分离材料，从中分离筛选出1株具有广谱抗菌活性的EB0901菌株，对其进行生物学特性观察和初步鉴定，同时进行了生长条件优化及抑菌活性的初步研究。结果如下：
　　 1.碱蓬内生菌的分离筛选采用组织表面消毒法分别从碱蓬根茎叶的300多个组织块中分离出104株植物内生菌。其中细菌5株、真菌99株。通过平板对峙法从5株细菌中筛选出对真菌有强烈拮抗作用的内生细菌，编号为EB0901菌株。
　　 2.EB0901菌株的形态学观察及鉴定通过对EB0901菌株进行形态学观察，其生物学特征是：该菌株在牛肉膏蛋白胨培养基上菌体为杆状，产生芽孢，周生鞭毛，是革兰氏阳性菌；生理生化特征测定显示：接触酶、淀粉水解、甲基红试验均呈阳性；V.P反应、硫化氢试验结果均呈阴性，是兼性厌氧型。参照《常见细菌系统鉴定手册》和《伯杰细菌鉴定手册》第八版，初步鉴定该菌株应归于盐芽孢杆菌属。
　　 3.EB0901菌株生长条件的优化初步研究了EB0901菌株的发酵条件，明确了较佳培养基组成及培养条件。以每升培养基中含有酵母膏5 g，淀粉30 g，牛肉膏6 g，硫酸铵0.2 g，蛋白胨10 g为宜，在起始pH7.0，接种量5％，NaCl浓度0.5％，培养温度35℃，摇床转速180 r·min-1的条件下生长最佳。
　　 4.EB0901菌株的抑菌活性EB0901菌株及其产物具有广谱抗菌活性。对8种植物病原真菌、6种细菌和5种霉菌均有不同程度的抑菌作用，其中对玉米大斑病菌、辣椒菌核病菌、平脐孺孢病菌、辣椒炭疽病菌等植物病原真菌的抑菌率达60％以上；对金黄色葡萄球菌和四联球菌的抑菌效果明显，抑菌率分别达67.03％和60.53％；对毛霉的抑菌率为62.03％，而对根霉无明显的抑菌作用。研究显示：该菌在植物病害防治方面具有良好的应用前景。

目录

文摘

英文文摘

第一章 绪论

1.1 植物内生菌

1.1.1 植物内生菌概念

1.1.2 植物内生菌种类

1.2 植物内生菌的生物学作用

1.2.1 促进植物生长作用

1.2.2 增强植物抗逆作用

1.2.3 代谢产生具有生理活性物质的理论基础

1.3 盐生植物碱蓬及其内生菌

1.3.1 盐生碱蓬的生态环境

1.3.2 碱蓬内生菌

1.4 研究背景、意义、内容、技术路线

1.4.1 研究背景

1.4.2 研究意义

1.4.3 研究内容

1.4.4 技术路线

第二章 碱蓬内生菌的分离纯化及鉴定

2.1 材料与方法

2.1.1 材料

2.1.2 方法

2.2 结果与分析

2.2.1 碱蓬内生菌分离纯化

2.2.2 EB0901菌株的鉴定

2.3 结论

第三章 碱蓬EB0901菌株生长条件的优化

3.1 材料与方法

3.1.1 材料

3.1.2 方法

3.2 结果与分析

3.2.1 EB0901菌株生长曲线

3.2.2 EB0901菌株抑菌活性曲线

3.2.3 不同温度对EB0901菌株生长的影响

3.2.4 不同pH值对EB0901菌株生长的影响

3.2.5 不同盐浓度对EB0901菌株生长的影响

3.2.6 不同碳、氮源对EB0901菌株生长的影响

3.3 结论

第四章 碱蓬EB0901菌株的抑菌活性研究

4.1 材料与方法

4.1.1 材料

4.1.2 方法

4.2 结果与分析

4.2.1 EB0901菌株对6种细菌的抑菌作用

4.2.2 EB0901菌株对5种霉菌的抑菌作用

4.2.3 EB0901菌株对8种植物病原菌的抑菌作用

4.3 结论

第五章 存在的问题与讨论

参考文献

个人简历

致谢