包埋玻璃化法超低温保存条斑紫菜O3D自由丝状体的研究

摘要

本文采用包埋-玻璃化法超低温保存条斑紫菜自由丝状体。将1.5g/10mL(鲜重)材料包埋于含30﹪的NaCl的3﹪的褐藻酸钙胶球中，在暗处恢复培养1d后用植物玻璃化溶液(plantvitrificationsolution，PVS)(5﹪(v/v)二甲基亚砜+30﹪(v/v)甘油+15﹪(v/v)乙二醇+0.4mol/L蔗糖溶液)在不同的条件下处理不同的时间。根据胶球内叶绿素的含量计算存活率。本文主要研究了PVS处理时间，装载条件，处理温度等因素对存活率的影响，以及在脱水过程和冰冻前后丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量以及超氧化物歧化酶(superoxidedismutas，SOD)活性的变化。结果如下： 1PVS处理时间对存活率的影响将30个胶球放入100﹪的PVS溶液中在4℃下分别处理(min)0，2，5，10，20。结果发现，在PVS处理5min后冻存的材料存活率最高为28.1﹪。 2.装载时间对条斑紫菜冰冻存活率的影响在用100﹪PVS脱水处理之前，用25﹪的PVS溶液对条斑紫菜丝状体在4℃下进行装载处理(min)0，2，5，10，20，结果显示，最佳装载时间为10min，经此过程冰冻后的材料的存活率由未经装载的28.7﹪提高到了42.3﹪。 3处理条件对条斑紫菜冰冻后存活率的影响在0℃条件下处理，条斑紫菜自由丝状体冰冻之后存活率从36.4﹪(25℃)增加到47.9﹪，提高了10个百分点。 4化冻条件对条斑紫菜冰冻存活率的影响研究发现：在40℃的化冻温度下，条斑紫菜丝状体的存活率显著高于0℃-20℃下的存活率，为41.9﹪。但是化冻温度超过40℃以后，虽然进一步提高了化冻速率，但存活率却有所下降。 5脱水和冰冻过程中MDA含量的变化冰冻后材料的MDA含量均高于未冰冻材料的MDA含量，同时经过装载处理的材料冰冻后的MDA含量低于未经装载的材料冰冻后的MDA含量，说明装载过程可以减少冰冻过程中对膜的伤害。 6脱水和冰冻过程中SOD活性的变化冰冻后材料的SOD活性均高于未冰冻材料的SOD活性，同时经过装载处理的材料冰冻后的SOD活性低于未经装载的材料冰冻后的SOD活性。

目录

摘要

前言:

1综述

2材料和方法

3结果与分析

4讨论

5结论

参考文献

致谢

学位论文独创性声明及学位论文版权的使用授权书