辽宁新品系绒山羊ZFX、ZFY基因片段的进化研究与性别鉴定

摘要

近年来，国外利用 ZFX、ZFY 基因对X染色体，Y染色体在物种进化方面进行了大量研究。同时采用ZFX和ZFY基因进行性别鉴定研究，其优点在于可靠性高，重现性好，简单方便，另外ZFX、ZFY基因有较大的同源性，可以利用共同的引物扩增，进行基因克隆和测序分析。而国内对此方面的研究却很少，特别是对绒山羊的研究尚未见报道。根据摩弗伦羊(Mouflon)和人(Human)的ZFX、ZFY基因序列以及相关文献设计引物，以雌雄辽宁新品系绒山羊的基因组DNA为模板，用PCR方法扩增并克隆其ZFX、ZFY基因第 11 号外显子的部分片段，进行序列测序。结果用NCBI的BLAST，生物软件Clustal X．exe、Mega、BioEdit．exe、DNAClub 等进行分析。对辽宁新品系绒山羊 (Liaoning New-breedingcashmere goat)、藏系绵羊(Tibetan sheep)、摩弗伦羊(Mouflon)、马(Horse)、山狗(Coyote)、猪(Pig)、鲸(Whale)、人(Human)和牛(Cow)的ZFX、ZFY基因的外显子同源性进行序列对比分析。用N-J 方法等构建分子系统树。通过各种不同的方法进行多方面的分析比对，分析结果表明：ZFX、ZFY基因两者核苷酸同源性达92％，推导的氨基酸同源性为95％。经分析可知，辽宁新品系绒山羊与摩弗伦羊亲缘关系最近，与其他物种的亲缘关系较远。本研究为探讨物种之间的起源进化关系提供了一定的理论依据。ZFY是Y染色体特有的基因，通过PCR技术扩增Y染色体相关序列，可有效的进行各种生物材料的性别鉴定。利用限制性内切酶AvaⅡ对辽宁新品系绒山羊ZFX、ZFY基因的PCR产物进行酶切，确定AvaⅡ为ZFX基因上的特异酶切位点，以此可以对辽宁新品系绒山羊性别进行鉴定。

目录

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声明

引言

第一章文献综述

1.1进化研究

1.1.1羊分子系统进化的研究现状

1.1.2绒山羊分子生物学研究进展

1.1.3进化分析的研究方法

1.2性别研究

1.2.1性别决定机理

1.2.2锌指结构基因

1.3性别鉴定方法

1.3.1 X、Y精子的分离

1.3.2胚胎性别鉴定

1.3.3 H-Y抗原法

1.3.4 X染色体相关酶法

1.3.5 Y染色体特异DNA探针杂交法

1.3.6多聚酶链式反应(PCR)法

1.3.7研究现状及存在问题

1.4性染色体连锁的基因与性别鉴定

1.4.1 Sry和Sox基因

1.4.2 ZFX和ZFY基因

1.4.3性别鉴定的意义

第二章辽宁新品系绒山羊ZFX、ZFY基因片段的进化研究与相关分析

2.1实验材料

2.1.1样本的采集及预处理

2.1.2引物

2.1.3试剂及仪器

2.2实验方法

2.2.1基因组DNA的提取

2.2.2 DNA浓度和纯度的检测

2.2.3设计引物

2.2.4 PCR扩增

2.2.5 PCR扩增产物的凝胶电泳

2.2.6 PCR产物的纯化

2.2.7目标片段的克隆

2.2.8序列测定

2.2.9序列分析

2.3结果与分析

2.3.1 PCR产物检测

2.3.2 ZFX/ZFY测序及结果分析

2.3.3分子系统树的构建

2.4讨论

2.4.1实验样本

2.4.2引物设计

2.4.3最佳PCR条件的建立

2.4.4 ZFX/ZFY基因的进化分析

第三章辽宁新品系绒山羊ZFX、ZFY基因片段的性别鉴定与相关分析

3.1实验材料

3.1.1样本的采集

3.1.2引物

3.1.3试剂及仪器

3.2实验方法

3.2.1基因组DNA的提取

3.2.2 DNA浓度和纯度的检测

3.2.3设计引物

3.2.4 PCR扩增

3.2.5 PCR扩增产物的凝胶电泳

3.2.6 PCR产物的纯化及酶切鉴定

3.2.7 DNA测序

3.3结果与分析

3.3.1 PCR产物检测

3.3.2 ZFX/ZFY测序结果及性别鉴定

3.4讨论

3.4.1目的基因的选择

3.4.2实验的方法

3.4.3性别鉴定的分析

第四章结论

参考文献

附录

致谢