稻瘟病拮抗菌解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定及其抑菌机制

摘要

稻瘟病是全球危害最严重的水稻病害之一。目前防治水稻稻瘟病的方法主要是化学防治，但是长期大量地使用会使病原菌产生耐药性和抗药性，对环境造成损害和污染，对人畜的健康构成威胁。因此，在不破坏环境的条件下，最大限度地保护水稻的产量，越来越多的人选择生物农药来防治水稻稻瘟病。
　　本研究从辽宁大连开发区近海海域采集的样品中，分离得到83株菌。采用平板对峙法和牛津杯法对稻瘟病菌进行的抑菌实验结果显示，有拮抗作用的海洋细菌4株，其中1株菌的抑菌效果最为明显，其对稻瘟病菌的抑菌圈直径为41.4mm，菌株号为BCHN-15。通过形态特征观察、生理生化鉴定、16S rDNA序列测定，BCHN-15菌株被鉴定为解淀粉芽孢杆菌。
　　BCHN-15菌株是一株具有广谱抗菌作用的微生物，该菌株所产生的代谢产物，对稻瘟病菌、禾谷镰刀病菌、茄病镰刀菌、弯孢菌、水稻白叶枯病菌和白色念珠菌等多种病原菌均有一定的抑制作用。BCHN-15菌株产生的代谢产物能抑制菌丝的生长，与对照组相比菌丝干重减少了74.36％。光学显微镜和扫描电子显微镜结果表明，经BCHN-15菌株发酵液作用后，稻瘟病菌丝体的形态发生变化，出现膨大、畸形、囊泡和断裂等。BCHN-15对稻瘟病菌的抑菌作用机制结果显示，BCHN-15菌株所产生的抑菌活性成分，能破坏稻瘟病菌细胞膜的渗透性，使稻瘟病细胞内的内容物如小分子无机离子，DNA和RNA等大分子，可溶性糖和可溶性蛋白等物质的外泄，导致菌体的死亡。BCHN-15菌株产生的发酵液对热稳定，但对酸碱敏感。该菌株发酵液可以经酸沉淀后获得抑菌活性成分，对稻瘟病菌有明显的抑菌活性，上清部分也有一定的抑菌活性，但对抑菌成分的分离与鉴定还需要进一步的研究。

目录

声明

摘要

1 绪论

1．1 稻瘟病概述

1．1．1 稻瘟病菌及其危害

1．1．2 稻瘟病的发病规律

1．2 稻瘟病的防治方法

1．2．1 抗性品种的培育

1．2．2 化学药剂防治

1．2．3 生物防治

1．3 海洋微生物对病虫害防治的研究进展

1．3．1 海洋微生物防治水稻病虫害的研究

1．3．2 海洋微生物防治小麦病虫害的研究

1．3．3 海洋微生物防治玉米病虫害的研究

1．3．4 海洋微生物防治蔬菜病虫害的研究

1．3．5 海洋微生物防治果树病虫害的研究

1．3．6 海洋微生物防治其他农作物病虫害的研究

1．4 解淀粉芽孢杆菌的相关研究

1．4．1 解淀粉芽孢杆菌的活性物质

1．4．2 解淀粉芽孢杆菌的抑菌机制

1．5 研究意义

2 稻瘟病菌及其拮抗菌的筛选分离与鉴定

2．1 实验材料

2．1．1 实验供试菌来源

2．1．2 培养基

2．1．3 实验药品与试剂

2．1．4 实验仪器

2．2 实验方法

2．2．1 稻瘟病菌的分离与鉴定

2．2．2 稻瘟病拮抗菌的筛选分离

2．2．3 稻瘟病拮抗菌的形态学鉴定

2．2．4 稻瘟病拮抗菌的生理生化鉴定

2．2．5 稻瘟病拮抗菌16S rDNA的鉴定

2．3 实验结果

2．3．1 稻瘟病菌的分离与鉴定

2．3．2 稻瘟病菌拮抗菌的筛选分离

2．3．3 BCHN-15菌株形态学鉴定

2．3．4 BCHN-15菌株生理生化鉴定

2．3．5 BCHN-15菌株16S rDNA鉴定

2．4 小结

3 BCHN-15菌株产生的代谢产物抑制稻瘟病菌的作用机制

3．1 实验材料

3．1．1 供试菌株

3．1．2 培养基

3．1．3 实验药品与试剂

3．1．4 实验仪器

3．2 实验方法

3．2．1 BCHN-15菌株发酵液对多种病原菌的抑制作用

3．2．2 BCHN-15菌株发酵液对稻瘟病菌菌丝重量变化的测定

3．2．3 BCHN-15菌株发酵液对温度稳定性的测定

3．2．4 BCHN-15菌株发酵液对酸碱稳定性的测定

3．2．5 BCHN-15菌株发酵液对稻瘟病菌菌丝形态的影响

3．2．6 BCHN-15菌株发酵液对稻瘟病菌培养液小分子物质的影响

3．2．7 BCHN-15菌株发酵液对稻瘟病菌培养液大分子物质的影响

3．2．8 BCHN-15菌株发酵液对稻瘟病菌培养液可溶性糖的影响

3．2．9 BCHN-15菌株发酵液对稻瘟病菌培养液可溶性蛋白的影响

3．2．10 BCHN-15菌株发酵液经酸沉淀后的抑菌作用的测定

3．2．11 数据处理

3．3 实验结果

3．3．1 BCHN-15菌株发酵液对多种病原菌的抑制作用

3．3．2 BCHN-15菌株发酵液对稻瘟病菌丝体重量变化的影响

3．3．3 BCHN-15菌株发酵液对温度稳定性

3．3．4 BCHN-15菌株发酵液对酸碱稳定性

3．3．5 BCHN-15菌株发酵液对稻瘟病菌菌丝形态的影响

3．3．6 BCHN-15菌株发酵液对稻瘟病菌培养液的电导率的影响

3．3．7 BCHN-15菌株发酵液对稻瘟病菌培养液大分子物质的影响

3．3．8 BCHN-15菌株发酵液对稻瘟病菌培养液可溶性糖的影响

3．3．9 BCHN-15菌株发酵液对稻瘟病菌培养液可溶性蛋白的影响

3．3．10 BCHN-15菌株发酵液经酸沉淀后的抑菌作用

3．4 小结

4 结论与展望

4．1 结论

4．2 展望

参考文献

附录

攻读硕士学位期间发表学术论文情况

致谢