rLj-RGD3毒素蛋白对Hep2细胞体外及荷瘤小鼠体内特性的影响

摘要

rLj-RGD3是一种来源于七鳃鳗口腔腺的重组蛋白。本课题组在前期工作中已经证明了rLj-RGD3具有强效的抗血管新生、抗血栓以及抗肿瘤活性，且已经成功确定了rLj-RGD3的纯化工艺。为进一步评价其抗肿瘤的药理药效学作用，本论文将对rLj-RGD3作用于喉癌上皮细胞Hep2的体内外生物学活性进行研究，并对其分子机制进行探讨。
　　通过MTT法确定了rLj-RGD3抑制Hep2细胞的增殖能力，其半数致死浓度为1.23μM。通过形态学观察、DNA Ladder、流式细胞术、TUNEL以及Hochest33258染色等研究方法，证实了rLj-RGD3能够诱导喉癌上皮细胞Hep2凋亡，且凋亡细胞数呈剂量依赖性方式增长。接下来，本论文通过划痕实验、细胞骨架形态学观察实验、Transwell迁移和侵袭实验证明了rLj-RGD3能够在体外环境中通过破坏细胞骨架从而有效抑制Hep2细胞的迁移和侵袭能力。Western Blot结果表明rLj-RGD3处理组Hep2细胞中活化的Caspase-9、3和7，切割失活的PARP以及Bax的含量显著增加，而活化的Caspase-8和Bcl-2的含量却没有发生明显的变化。除此之外，rLj-RGD3还能明显地下调Hep2细胞内磷酸化蛋白激酶B、磷酸化黏着斑激酶、磷酸化磷酸肌醇特异性磷脂酶C以及桩蛋白的水平，并同时上调p-p38的水平。这意味着rLj-RGD3能够通过内源性途径以及整合素相关信号通路分子作用于Hep2细胞。为了研究rLj-RGD3在小鼠体内的抗肿瘤活性，本论文建立了BALB/c裸鼠移植瘤模型。实验结果表明，rLj-RGD3对Hep2移植瘤具有显著的抑制作用，且没有毒性。
　　综上，rLj-RGD3对喉癌上皮细胞Hep2在体外和荷瘤小鼠体内实验中均具有显著的抑癌作用。因此，rLj-RGD3有望成为一种新型的抗肿瘤药物，期待其在肿瘤的前期治疗和术后转移的预防中取得不俗的效果。

目录

声明

引言

1 绪论 整合素与恶性肿瘤的关系及以其为靶点的RGD肽抗肿瘤研究进展

1.1 肿瘤血管新生与肿瘤微环境

1.2 整合素与恶性肿瘤

1.3 RGD多肽研究新进展

1.4 总结

2.1 材料

2.2 方法

2.3 结果

2.4 讨论

2.5 结论

3.1 材料

3.2 方法

3.3 结果

3.4 讨论

3.5 结论

4.1 材料

4.2 方法

4.3 结果

4.4 讨论

4.5 结论

参考文献

致谢