含MK启动子腺病毒载体构建的基础研究

摘要

该项研究采用基因工程方法,对人的5型腺病毒的基因进行改造,在目前现有的溶瘤性腺病毒的基础上,插入行异性启动子MK和目的基因E1A,使得构建的腺病毒载体只能在表达MK的肿瘤细胞中复制、增殖,发挥溶瘤作用;插入的目的基因E1A又具有多种抗肿瘤活性.因此,构建的腺病毒载体既具有很强的肿瘤靶向性,又具有良好的抗肿瘤活性.方法:实验主要采用同源重组的方法进行腺病毒载体的构建,具体包括如下几个过程:目的片段MK—AP—IRES—E1Am的获取、连接、筛选;目的片段插入Pshuttle质粒中;含目的片段的Pshuttle质粒与pAdEasy1同源重组;重组腺病毒转染至人胚肾细胞HEK293细胞中;转染后病毒的检测.结论:应用同源重组的方法可以构建含MK启动子和目的基因E1A的腺病毒载体;通过酶切鉴定,证实获得了含MK启动子,E1A基因的阳性重组腺病毒DNA,该重组腺病毒可转染HEK293细胞,并能在HEK293细胞中进行有效复制.结论:成功构建了含MK启动子的条件复制腺病毒载体,为进一步研究该腺病毒的功能提供了条件.

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前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述 Midkine 与肿瘤

参考文献

致谢