凉血活血复方对体外培养HaCaT、ECV304细胞的增殖、凋亡、及端粒酶活性的影响

摘要

为了进一步开发临床治疗银屑病的有效的方剂并以科学的检测手段判定中药药效和探索中药治疗银屑病的可能的机制。本研究在先前临床研究的基础上，观察自拟银屑病方剂-凉血活血复方水醇粗提液对人用生化表皮细胞(HaCaT细胞株)、人脐静脉内皮细胞(ECV304细胞株)的增殖抑制效应、细胞凋亡诱导作用以及其对细胞株端粒酶活性的影响，探讨该复方治疗银屑病作用的有效浓度范围及其可能的作用机制，为该复方的临床应用及中成药的开发奠定科学的实验基础。 方法：银屑病的主要病理变化为表皮增殖过快和分化不全、真皮炎症浸润和乳头部微血管变化。本研究以体外培养的人永生化表皮细胞(HaCaT细胞株)及脐静脉内皮细胞(ECV304细胞株)分别模拟表皮角质细胞增殖过快及乳头部微血管变化之模型。将不同浓度的凉血活血复方水醇粗提液分别地作用于体外培养的HaCaT细胞株、ECV304细胞株，采用MTT法检测凉血活血复方水醇粗提液对细胞的增殖抑制作用以及药物的有效浓度范围及其IC50；采用倒置显微镜、投射电子显微镜观察细胞处理前后的细胞形态学改变；应用流式细胞术检测细胞周期的变化及凋亡比率；应用端粒重复序列扩增-酶联吸附(TRAP-ELAISA)试剂盒检测两株细胞的端粒酶活性变化。 结果：(1)凉血活血复方可以抑制HaCaT细胞株、ECV304细胞株的增殖，对HaCaT细胞株、ECV304细胞株的抑制作用在一定浓度范围内呈明显的时间和浓度依赖性。(2)光镜下可见两株细胞呈现典型的凋亡细胞形态学特征。(3)复方分别作用两株细胞48小时，细胞端粒酶活性，在所测定实验浓度范围内，呈浓度依赖性。各加药组与对照组在统计学上有显著性差异，且各加药组之间亦有统计学显著性差异(P＜0.01)。 结论： 1.凉血活血复方对HaCaT细胞、ECV304细胞增殖的抑制作用在一定浓度范围内呈明显的时间和浓度依赖性。在统计学上细胞增殖抑制率与时间、药物浓度呈线性正相关。 2.凉血活血复方能够使HaCaT细胞、ECV304细胞的细胞分裂周期阻滞于G2/M期，细胞堆积于G2/M期而凋亡。 3.凉血活血复方作用48小时，HaCaT细胞、ECV304细胞与对照组相比，端粒酶活性显著下调，且该下调作用随药物浓度增加而逐渐增强。 4.凉血活血复方可能是通过下调微血管内皮细胞的端粒酶活性从而抑制内皮细胞增殖、诱导其细胞凋亡而达到抗银屑病的作用。并且，可能是优先通过诱导血管内皮细胞的凋亡，而抑制微血管生成，然后诱导角质形成细胞凋亡，抑制其过度增殖，从而以多靶点的形式达到抗银屑病的作用。 5.凉血活血复方在细胞模型实验研究方面有较好的效果，具有较好的开发与应用前景。

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综述 中医治疗银屑病的实验模型研究进展

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