蛋白激酶Cζ在人类非小细胞肺癌趋化运动中的功能研究

摘要

目的：探讨蛋白激酶Cζ(PKCζ)在表皮生长因子及其受体(EGF-EGFR)诱导的人类非小细胞肺癌(A549、H1299)趋化运动中所起的作用，并尝试为抗肺癌转移治疗寻找一个有效靶点。 方法：以人类非小细胞肺癌株A549、H1299为研究对象，利用Westernblotting和RT-PCR验证EGFR和PKCζ在其中的表达；利用EGF和SDF-1α/CXCL12为诱导物对A549进行趋化实验，比较两种诱导物对A549趋化能力的影响；使用针对不同PKC亚型的抑制剂和PKCζ假底物处理细胞，在有或者无EGF诱导下进行趋化实验，无EGF刺激作为阴性对照，比较不同亚型PKC分子在趋化运动中的作用；选用免疫荧光染色技术分析细胞中PKCζ的迁移以及丝状肌动蛋白(F-actin)的聚合情况；用流式细胞仪分析在PKCζ假底物处理前后细胞表面EGFR表达水平；通过AlexaFluor568甲醇抽提/phalloidin细胞染色，并用578nm、600nm的激发光和发射光进行荧光定量分析F-actin含量；细胞用抑制剂和假底物处理后，在有或无EGF刺激下贴壁相应时间，计数黏附细胞数目。 结果：EGF对A549细胞诱导的趋化指数比CXCL12诱导的高出近3.6倍；在各种PKC分子的抑制剂中，Chelerythrinechloride(所有PKC分子的抑制剂)及myr-假底物对EGF诱导的趋化运动的阻断具有剂量依赖性，但其他抑制剂仍可以使EGF诱导出趋化运动；EGF诱导的信号转导通路导致F-actin的聚集，Chelerythrinechloride和myr-假底物都可以抑制F-actin的聚集，而Go6850仍可以使EGF诱导出F-actin的聚集；EGF可以诱导快速的细胞黏附，Go6850并没有影响基础和EGF诱导的细胞黏附；LY294002、U73122、Chelerythrinechloride和myr-假底物可以单独阻断EGF诱导的快速黏附；在未受刺激的细胞中PKCζ主要分布在胞浆中，EGF刺激后，细胞荧光信号重新分布到了胞膜，myr-假底物干扰了EGF诱导的PKCζ移位；Westernblotting、RT-PCR和FACS的结果表明这两个肺癌细胞系高表达PKCζ和EGFR，且myr-假底物处理后不会使EGFR表达明显下调。 结论：1.在人类非小细胞肺癌中，EGF诱导趋化运动的能力强于趋化因子SDF-1α/CXCL12。2.PKCζ在EGF诱导的人类非小细胞肺癌趋化运动中是一个非常重要的分子。 因此，抑制PKCζ的活性有可能抑制肺癌转移，从而揭示了PKCζ分子可能成为潜在的抗癌转移靶点。

目录

独创性声明及学位论文版权使用授权书

摘要

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述蛋白激酶Cζ功能研究进展

致谢