结核分枝杆菌RmlB的表达、纯化及酶促反应动力学研究

摘要

本论文的目的是：(1)用PCR法从结核分枝杆菌基因组DNA中扩增Tb rmlB基因：(2)将Tb rmlB基因克隆到pMD18-T的克隆载体中，并对DNA序列进行测定；(3)将Tb rmlB基因亚克隆到pET29b表达载体中并通过改变不同的诱导条件在大肠杆菌BL21(DE3)中表达RmlB蛋白质；(4)用亲和层析法纯化重组RmlB蛋白质，并用Western Blotting方法鉴定RmlB蛋白质；(5)建立测定RmlB酶的活性；(6)确定RmlB酶的最佳反应条件并测定RmlB酶的反应动力学常数。 结论： 在本研究中，我们构建了pET29b-Tb rmlB表达载体，在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出大量的可溶性RmlB蛋白。用纯化的蛋白研究酶的活性，确定了RmlB的最佳反应条件并测定了RmlB酶蛋白的反应动力学常数Km和Vmax。为建立完善的筛选抗结核药物的酶反应体系奠定了基础。

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综述分枝杆菌糖肽脂类（GPLs）的结构和作用

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