中药肝复康对实验性肝纤维化大鼠细胞外基质及其相关因子的影响

摘要

目的：观察肝复康作用实验性肝纤维化大鼠后血清细胞外基质标志物（Ⅳ型胶原、Ⅲ型前胶原、透明质酸、层粘连蛋白）的变化情况及与细胞外基质降解与沉积有关的基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶抑制因子-2（TIMP-2）基因表达变化。以期深入探讨肝纤维化的发生、发展及逆转过程机制，最终为临床诊断及改善肝纤维化的治疗现状提供新思路。 方法：健康SD大鼠77只，将其随机分为正常对照组（C）10只，模型组（M）11只，模型对照组（MC）11只，低剂量治疗组（LT）10只、中剂量治疗组（MT）12只、高剂量治疗组（HT）12只，预防组（P）11只。除正常对照组外，余鼠造模。皮下注射以橄榄油稀释的10%的四氯化碳，5ml/kg，每周两次，共12周，正常对照组以同样方法皮下注射生理盐水。其中预防组于造模同时以312.5mg/kg.d剂量的肝复康煎剂（主要成分为丹参、黄芪、赤芍、白芍、柴胡等）灌胃12周。高剂量治疗组、中剂量治疗组、低剂量治疗组则于造模第9周后开始分别以3125mg/kg.d、312.5mg/kg.d、31.25mg/kg.d剂量的肝复康灌胃12周。以上各剂量药物均溶于10ml/kg的生理盐水中。正常对照组及模型对照组则以等容量的生理盐水灌胃。第12周末将模型组、预防组大鼠隔夜禁食，次日称量体重后，以乙醚麻醉腹主动脉采血检测各项指标，处死大鼠，迅速取出肝组织，从肝右叶的中部切取肝组织于-70℃冰箱保存用于RT-PCR。第20周末将其余各组大鼠以同样方法处死，取出肝组织，备用。应用放射免疫分析法检测大鼠血清样本中各项指标的变化情况（Ⅳ型胶原、Ⅲ型前胶原、透明质酸、层粘连蛋白）；采用RT-PCR法检测各组大鼠肝组织中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶抑制因子-2（TIMP-2）基因的表达情况，用Olympus显微摄像系统采集图片，用图像分析软件测定其积分光密度（IOD），以IOD值表示表达水平，对IOD值进行分析和比较。 结果：1、模型组及模型对照组血清Ⅳ型胶原、Ⅲ型前胶原、透明质酸、层粘连蛋白含量较之正常对照组均有明显增高（P=0.000），预防组与正常对照组血清四项指标比较无显著差异（P>0.05）。经不同剂量的中药肝复康干预后，该四项指标血清值均有明显降低（P<0.05），并以中剂量组作用效果最明显；2、基于RT-PCR和其IOD值检测得到的结果提示：MMP-2和TIMP-2在正常对照组表达微弱，在肝脏纤维化模型及模型对照组表达较正常对照组显著增强（P<0.05），经不同剂量的中药肝复康治疗后表达均有明显降低（P<0.05），其中中剂量治疗组降低水平最为显著，其表达水平基本恢复至正常大鼠相应表达水平，治疗效果优于高剂量、低剂量。 结论：①中药肝复康具有较好的预防和治疗肝纤维化作用，并且以中剂量作用效果最为明显，是较为合理的用药剂量。②中药肝复康可以通过抑制胶原合成，减少ECM生成减轻大鼠肝纤维化程度。③中药肝复康可能通过解除MMP-2的抑制因素而提高其活性，以促进胶原降解。④中药肝复康通过调控基因表达水平，抑制MMP-2和TIMP-2mRNA表达，使MMP-2/TIMP-2趋于平衡，从而发挥其抗纤维化的作用。

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综述：细胞外基质与肝纤维化

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