犬黄疸模型的制备及拆分胆红素-白蛋白复合物对CA/PEI膜降黄的影响

摘要

目的：为提高CA/PEI膜对黄疸血清胆红素（bilirubin，BIL）的吸附率，本实验首次将拆分BIL和载体白蛋白（albumin，ALB）复合物的方法应用于CA/PEI膜吸附BIL前。制备胆汁淤积性和溶血性黄疸犬模型，获取不同性质的黄疸血清，比较联合拆分后，CA/PEI膜吸附实验前后总胆红素（total bilirubin，TB）、结合胆红素（conjugated bilirubin，CB）、非结合胆红素（unconjugated bilirubin，UCB）和ALB浓度的变化，考察拆分对CA/PEI膜清除BIL的影响。 方法： 1．建立胆汁淤积性黄疸犬模型：成年杂种犬2只，应用溴甲酚绿法、钒酸盐法和循环酶法测定血清TB、CB、ALB和总胆汁酸（total bile acid，TBA）基础浓度。分别采用胆总管末端结扎和胆总管-腔静脉搭桥的方法建立模型，术后常规喂养，抗炎，监测BIL浓度变化。前者术后隔日采血30ml，共8次，后者术后每日采血30ml，共6次。 2．建立溶血性黄疸犬模型：成年杂种犬2只，上述方法测定血清TB、CB、ALB和TBA基础浓度。分别以3mg/kg和5mg/kg注射标准BIL溶液。于30、60和90分钟后各采血30ml。 3．将所得黄疸血清分别分为三组：A组为过膜前组，作为对照；B组为过膜组，采用静态吸附法过膜2小时；C组为拆分+过膜组，先加入适量的去氧胆酸钠，磷酸盐缓冲液拆分BIL与ALB，再行上述方法吸附BIL；过膜后重复测定上述生化指标，比较B、C两组对TB、CB、UCB的清除率，以及TB清除率分别与TB浓度和ALB浓度的相关性。 结果： 1．黄疸动物模型BIL变化：胆总管结扎法和胆总管-腔静脉搭桥法均可制备胆汁淤积性黄疸模型，前者术后BIL浓度呈现上升-平缓-下降趋势，12天后TB最高达134．9μmol/L，28天后BIL浓度降至正常水平，一般状况良好，无并发症发生。后者BIL浓度在短时间内迅速升高，6天后TB达201μmol/L，但一般状况差，1周后死亡。标准BIL溶液注射法可制备溶血性黄疸模型，犬无明显异常。监测BIL浓度在相同时间内高剂量比低剂量的黄疸加重，其中UCB显著升高，两种注射剂量组测得TB浓度分别可达105．8μmol/L和209．2μmol/L。 2．拆分对膜清除胆汁淤积性黄疸血清BIL影响：B、C组对BIL均有明显的清除作用。C组对TB、UCB的清除率与B组相比有显著性差异，P值均<0．01；但对CB的清除率，两组无明显差异，P>0．05；两组对TB的清除率均与TB浓度呈正相关，分别为r=0．906和r=0．932；B组TB清除率与ALB浓度呈负相关，r=-0．624；而C组TB清除率与ALB浓度无显著相关性。C组TBA浓度显著升高，P<0．01。 3．拆分对膜清除溶血性黄疸血清BIL影响：B、C组对BIL均有明显的清除作用。C组对TB、UCB的清除率与B组相比有显著性差异，P均<0．01；对CB的清除率，两组无明显差异，P>0．05；两组对TB的清除率均与TB浓度呈正相关，分别为r=0．966和r=0．962；B组TB清除率与ALB浓度呈负相关，r=-0．816；而C组TB清除率与ALB浓度无显著相关性。C组TBA浓度显著升高，P<0．01。 结论： 1．胆总管结扎和胆总管-腔静脉搭桥均能建立犬胆汁淤积性黄疸模型，前者操作简单，无不良反应，但存在再通率；后者术式相对复杂，可快速形成黄疸，但术后耐受性差；BIL静脉注射可在短时间内建立溶血性黄疸犬模型。 2．加入拆分剂去氧胆酸钠后，CA/PEI膜对用以上两种方法制备的犬胆汁淤积性黄疸血清和溶血性黄疸血清中TB、UCB均显示有更好的清除效果，且降黄作用不受ALB浓度的影响。但同时发现因加入了去氧胆酸钠，TBA浓度显著升高，为进一步研究提出了新问题。

目录

文摘

英文文摘

声明

综述：非生物型人工肝应用的肝外影响

前言

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

致谢