胃肠间质瘤c-kit基因表达和外显子11突变与临床病理关系的研究

摘要

目的：胃肠间质瘤(gastrointestinal stromal tumor，GIST)是近十年来逐渐被认识的独立的临床病理实体，它包括了以往大部分的胃肠道平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、神经鞘瘤等，是发生于胃肠道的最常见的间叶源性肿瘤，占胃肠道肿瘤的1％-4%，近年来其发病率有增高的趋势。目前，多数病理学家和临床肿瘤学家都认为，所有GIST都有转移的风险，只有低危恶性的GIST，没有绝对良性的GIST。GIST对常规化疗和放疗极不敏感，治疗主要依赖于手术，但术后复发与转移率较高，可以产生众多的带瘤生存患者，常常需要对肿瘤实施多次手术。因此，积极研究影响GIST生物学行为和预后的主要因素，给予针对性干预有可能改善其预后。目前一致认为，GIST的主要发病机制是c-kit原癌基因突变，导致酪氨酸激酶持续活化，细胞增殖、分化失控所致。研究表明c-kit基因突变位点主要在外显子9、11、13、17，其中以外显子11最为常见。外显子11突变与GIST的生物学行为、预后以及药物治疗效果密切相关。有关c-kit基因表达和基因突变与GIST临床病理特点的关系，研究报道较多，但结果差异较大，尤其外显子11突变与c-kit基因表达量以及它们与GIST临床病理的关系，研究报道较少。
　　 本研究的目的是从蛋白水平和mRNA转录水平研究胃肠间质瘤c-kit基因表达和外显子11突变与临床病理的关系，尤其外显子11突变和c-kit基因表达之间的关系，探讨从基因表达(蛋白和mRNA)水平预测c-kit基因突变和肿瘤生物学行为的可能性，为GIST的治疗和判断预后提供参考依据。
　　 方法：选取2005-2009年大连医科大学附属二院病理资料完整、诊断明确的GIST标本50例（其中5例标本同时收集新鲜标本组织）。用免疫组化、Western-Blot及半定量RT-PCR方法检测c-kit基因的表达；通过聚合酶链式反应-单链构象多态(PCR-SSCP)方法筛选c-kit基因外显子11突变病例，分析c-kit基因表达和外显子11突变与GIST临床病理特点之间的关系；探讨c-kit外显子11突变与c-kit基因表达量之间的关系。实验数据用SPSS11.5统计分析软件进行处理。
　　 结果：1、免疫组化检测KIT蛋白在低分化GIST中表达强度较高(p＜0.05)；
　　 2、Western blot结果发现KIT成熟蛋白在中高侵袭危险程度GIST中表达量较高(p＜0.05)；
　　 3、c-kit基因外显子11突变率为52%(26/50)，发生在女性、肿瘤最大径＞5cm、核分裂数＞5及中高度侵袭危险性的GIST外显子11突变率较高(p＜0.05)；
　　 4、在外显子11突变的GIST中成熟型KIT蛋白表达量较高(p＜0.05)。
　　 结论：1、KIT蛋白翻译后的修饰形式-KIT成熟蛋白可能在GIST发生、发展中起重要作用，并且与GIST高度侵袭危险性的生物学行为相关。
　　 2、KIT蛋白总体表达量及c-kit基因mRNA表达量与GIST临床病理特点无显著关系。
　　 3、c-kit基因外显子11突变可能是GIST恶性生物学行为的指标。
　　 4、c-kit基因外显子11突变与KIT成熟蛋白表达量增加有一定关系。
　　 5、免疫组化检测KIT蛋白表达强度对GIST的诊断价值大于判断其生物学行为的价值。