榄香烯体内外抑制小鼠肝癌H22细胞增殖与诱导凋亡作用的研究

摘要

目的：研究中药莪术提取物榄香烯制剂(Elemene)对小鼠肝癌H22细胞增殖的抑制作用及其抑制的途径是通过诱导细胞凋亡来实现的。
　　 方法：将35只健康清洁的Balb/C小鼠，随机分为5组：榄香烯高剂量组(100mg/kg)，榄香烯低剂量组(50mg/kg)，榄香烯(50mg/kg)联合5-FU(20mg/kg)组，5-FU组(20mgkg)，正常对照组（0.9％氯化钠0.2ml/只）。体内实验是通过建立H22小鼠肝癌实体瘤模型，观察榄香烯对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用，TdT酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞。体外进行细胞培养，采用MTT法检测榄香烯对细胞增殖的抑制作用，Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞的早期凋亡。
　　 结果：不同实验组对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用程度不同，5-氟脲嘧啶组抑制肿瘤生长作用最明显，榄香烯高剂量组较低剂量组抑瘤效果明显。可以观察到在用药后的第1天各治疗组小鼠瘤体积与对照组比较无明显差异，在用药第3天5-FU组、联合组小鼠瘤体积与对照组比较差异有统计学意义(*P＜0.05)，在接下来的第5、7、9天4组用药组小鼠瘤体积与对照组比较差异均具有统计学意义(*P＜0.05，**P＜0.01)。MTT法检测到榄香烯对H22细胞的活力具有抑制作用，并且呈剂量和作用时间的依赖性，不同浓度的榄香烯（100、50、25、12.5、6.25μg/ml）作用于H22细胞24、48、72h后，榄香烯组与对照组比较差异均有统计学意义(*P＜0.05，**P＜0.01)；AnnexinV-FITC/PI法检测到早期凋亡细胞，随着药物作用时间及浓度的增加，凋亡率也随之增加。当作用时间为24h时时，榄香烯高剂量、低剂量组分别与对照组比较差异具有显著性(*P＜0.05)；当作用时间延长至48h时，榄香烯高剂量、低剂量组分别与对照组比较差异具有显著性(*P＜0.05)。TUNEL法检测到凋亡细胞，榄香烯组与对照组比较差异均有统计学意义(*P＜0.05)。
　　 结论：不同浓度的榄香烯均可有效抑制小鼠肝癌H22细胞的增殖，随着榄香烯浓度的增加及作用时间的延长，细胞的活力在降低。采用Annexin V-FITC/PI法经过流式细胞仪的检测，其抑制癌细胞增殖的途径可能是通过诱导细胞发生凋亡而完成的。进一步行TdT酶介导的原经缺口末端标志法(TUNEL)检测到凋亡细胞，再一次证实其诱导凋亡抑制癌细胞增殖的途径。但对于其具体的内在机制及相关蛋白，仍需要进一步的深入研究。