降解草酸益生菌的筛选及其对实验动物的功效研究

摘要

目的:
　　 1.从传统发酵食品中筛选多株具有降解草酸能力的乳酸菌株，并通过其它的功能评价，筛选出一株最佳乳酸菌菌株。
　　 2.对筛选出的最佳乳酸菌菌株进行初步安全性评价。
　　 3.观察筛选出的菌株对肾结石模型大鼠影响。
　　 方法:
　　 1.目的菌株的初筛，其它功能评价
　　 将传统发酵食品中筛选出的乳酸菌接种在添加10％的草酸的液体MRS培养基中，培养48h，检测发酵液中草酸的剩余含量。选出六到八株降解草酸率最高的菌株作为候选菌株进行进一步研究。
　　 候选菌株其它功能评价包括耐酸、耐胆碱实验，候选菌株发酵液对致病菌的抑制实验，耐肠道酶（胰蛋白酶、胃蛋白酶）实验，对细胞HT-29（人结肠癌细胞）的粘附实验及抗生素敏感实验，根据以上实验结果选择出最佳菌株。
　　 2.目的菌株的初步安全性评价
　　 目的菌株的初步安全性评价实验包括:急性毒性实验，细菌易位实验以及质粒的检测。
　　 3.目的菌株对大鼠肾结石模型的干预
　　 将wistar大鼠随机分四组:正常对照组（对照组），草酸钙结石模型组（模型组），乳酸菌低剂量干预组（低剂量组），乳酸菌高剂量干预组（高剂量组）。构建大鼠肾结石模型的同时灌胃目的菌株的牛奶发酵乳，实验第29天，测量各组大鼠的体重，收集24h尿液测尿液中钙离子，草酸，柠檬酸的含量。取大鼠左肾制作石蜡切片，观察各个实验组结石发生情况。
　　 4.菌种鉴定
　　 对筛选出的菌株进行菌种鉴定，确定种属性。
　　 结果:
　　 1.从传统发酵食品中共筛选出344株乳酸菌，选择其中降解草酸率最高的菌株作为候选菌株:DM8320、DM9207、DM9176、DM9147、DM9162、DM9172。
　　 以上六株菌的其它功能性筛选结果表明，DM9207、DM9147、DM9172不同胆盐浓度条件下的存活率较均低，DM9162在不同pH下增殖倍数较低，且其发酵上清液的抑菌效果较差，DM9176对多种抗生素具有耐药性，基于以上原因，选择DM8320为最佳菌株，进行后续实验。
　　 2.初步安全性评价实验中，菌株DM8320中未发现含有质粒;血液、肝、脾组织匀浆液中不含有该菌;在毒力实验中，小鼠活动正常，无毒性反应或死亡现象发生。
　　 3.目的菌株对大鼠肾结石模型的干预实验中，除模型组外，对照组、高剂量组、低剂量组体重变化呈上升趋势。第29天各组大鼠体重结果显示，结石模型组与对照组、高剂量组、低剂量组相比体重较低(p＜0.05);高剂量组、低剂量组的钙离子，草酸根离子含量与结石组相比较低(p＜0.05)，高剂量组、低剂量组的柠檬酸含量与结石组相比较高(p＜0.05)。
　　 各组大鼠肾脏石蜡切片个观察到结石组，低剂量组及高剂量组肾皮质中含有不同程度肾结石结晶。结石组中结石含量最多，低剂量组次之，高剂量组肾结石结晶含量较少。
　　 4.菌种鉴定
　　 经鉴定，DM8320为路氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)。
　　 结论:
　　 1.传统发酵食品筛选出的344株乳酸菌中，菌株DM8320具有高效体外降解草酸的能力和良好的其他生物功能。菌株DM8320为路氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)。
　　 2.菌株DM8320不具有急毒性，正常情况下不会发生细菌易位现象，不含有质粒。
　　 3.菌株DM8320对wistar大鼠肾结石的形成具有一定的抑制作用。

目录

声明

摘要

前言

材料和方法

一、实验材料

二、方法

结果

(一)具有降解草酸能力菌株的筛选

(二)对DM8320菌株的初步安全性评价

(三)菌株DM8320对大鼠肾结石模型的干预

(四)菌种鉴定结果

讨论

1．具有降解草酸能力菌株的筛选

2．对DM8320菌株的初步安全性评价

3．DM8320菌株对大鼠肾结石形成的干预

结论

参考文献

综述

致谢