大承气汤修复阳明腑实证大鼠肠神经-ICC-DMP间信号转导通路损伤实验研究

摘要

背景:阳明腑实证是指在外感热病病程中所出现的邪热内炽，又伴有腹部实证症状的一组全身性综合证候。阳明腑实证患者临床上均有不同程度的腹部胀满、疼痛、大便秘结等胃肠运动功能障碍表现。胃肠道功能的好坏已成为判断危重病人预后的一项重要指标。近来研究已证实胃肠Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal，ICC)是一种与神经和平滑肌细胞密切相关的间质细胞，广泛存在于胃肠组织中，在胃肠运动调控中起重要作用。胃肠神经—ICC—平滑肌网络作为胃肠动力的基本功能单位，肠神经—ICC-DMP间信号转导和胃肠运动功能密切相关。目的:以阳明腑实证大鼠为研究对象，观察肠神经-深肌丛ICC(ICC-DMP)间信号转导通路的表达变化以及大承气汤治疗作用。探讨阳明腑实证致胃肠运动障碍的本质和大承气汤(DCQD)治疗阳明腑实证机理。
　　 方法:健康成年Wistar大鼠100只，雌雄各半，体重200g-250g，随机分为对照组（20只）、阳明腑实证组（40只）和DCQD治疗组（40只）。对照组动物腹腔注射1.0ml生理盐水。阳明腑实证组灌服热性中药、自身粪便灌胃，然后腹腔注射1.0mlE.coloi.混悬液建立阳明腑实证模型。治疗组于造模成功后即给予大承气汤灌胃，2次/日，每次1.0ml/100g，连用5日。取各组存活大鼠上段小肠组织制作小肠全厚肌层组织标本及石蜡切片。进行c-Kit抗体和PKA、PKC、caveolin-1抗体免疫荧光双标记染色后，激光扫描共聚焦显微镜及免疫组化检测、分析。
　　 结果:大体标本:阳明腑实证组大鼠较对照组胃肠极度扩张，肠梗阻征象明显;DCQD治疗组大鼠胃肠扩张、梗阻较阳明腑实证组明显减轻。
　　 激光扫描荧光共聚焦显微镜检测:与对照组相比，阳明腑实证组小肠ICC-DMP数量明显减少（P＜0.01），细胞荧光IOD值明显减弱（P＜0.01），网络样结构受到明显的破坏;阳明腑实证组小肠PKA、PKC、caveolin-1荧光IOD值较对照组明显减弱(P＜0.01)。与阳明腑实证组相比，DCQD治疗组小肠ICC-DMP数量明显增多（P＜0.01），细胞荧光IOD值明显增强（P＜0.01），基本保持完整的网络状结构;小肠PKA、PKC、caveolin-1荧光IOD值较阳明腑实证组明显增强（P＜0.01）。
　　 免疫组化学检测:与对照组相比，阳明腑实证组小肠ICC表达量明显减小(P＜0.01)，呈散在分布，条带样结构的连续性受到破坏。PKA、PKC、caveolin-1蛋白表达较对照组明显减小(P＜0.01)。与阳明腑实证组相比，DCQD治疗组小肠ICC表达量明显增加(P＜0.01)，条带样结构基本保持完整。PKA、PKC、caveolin-1蛋白表达较阳明腑实证组明显增加（P＜0.01）。
　　 结论:阳明腑实证大鼠胃肠扩张，梗阻征象明显;DCQD能够显著改善其胃肠道梗阻症状。阳明腑实证时，小肠ICC-DMP数量减少，网络结构受到破坏;肠神经—ICC-DMP间信号转导通路受到损伤。DCQD可以减轻阳明腑实证时ICC-DMP受到的损伤，基本维持ICC-DMP网络结构的完整;修复肠神经—ICC-DMP间信号转导通路受到的破坏，改善阳明腑实证大鼠胃肠运动障碍，有效治疗阳明腑实证。