P-gp、MRP、LRP、GST-π和TOPOⅡα的表达与人NSCLC耐药相关性的临床研究

摘要

目的:人非小细胞肺癌(NSCLC)的耐药机制非常复杂，涉及多种因素，其中耐药相关蛋白的过度表达是重要原因。目前研究较多的耐药相关蛋白主要有:P-糖蛋白(P-gp)，多药耐药相关蛋白(MRP)，肺耐药蛋白(LRP)，谷胱甘肽转移酶π(GST-π)，拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)，它们在NSCLC耐药中发挥了重要的作用。因此本研究以人肺癌组织为研究对象，应用原代细胞培养、RT-PCR、Westernblot和免疫组化等方法，检测肺癌组织中P-gp等五种耐药相关蛋白的表达水平;同时，根据不同病理类型的肺癌组织在化疗药物顺铂、吉西他滨和紫杉醇作用下的IC50值，分析P-gp等耐药蛋白与肺癌耐药的相关性，进一步探讨这些耐药相关蛋白在肺癌耐药中的作用。
　　 方法:收集2010年10月-2011年6月大连医科大学附属第一医院胸外科手术切除的16例的新鲜肺癌组织进行细胞原代培养，采用四噻唑蓝(methylthiazo-letrazolium，MTT)法检测肺癌原代细胞对顺铂、吉西他滨和紫杉醇三种化疗药物的体外敏感程度，计算细胞生存率和耐药率;采用RT-PCR、Westernbolt和免疫组织化学方法检测P-gp、MRP、LRP、GST-π和TopoⅡα在上述肺癌组织及其对应的癌旁肺组织中核酸及蛋白的表达水平;采用Pearson相关分析方法分析三种化疗药物作用下的原代肺癌细胞生存率与肺癌组织中P-gp、MRP、LRP、GST-π和TopoⅡα表达的相关性，从而分析P-gp等耐药蛋白与肺癌耐药的相关性。
　　 结果:1.P-gp等五种耐药蛋白在不同病理类型及分期的肺癌组织中均有表达，但表达水平明显不同。例如腺癌中LRP、P-gp的表达明显高于鳞癌，而鳞癌中GST-π和TopoⅡα的表达明显高于腺癌。GST-π在高分化肺癌中的表达高于低分化肺癌，低分化肺癌中LRP的表达明显高于高分化肺癌;但P-gp等五种耐药蛋白在癌旁组织中低表达或不表达。2.不同病理类型及分期的原代肺癌细胞对顺铂、吉西他滨和紫杉醇三种化疗药物的敏感性不同。如腺癌细胞对三种药物的敏感性均高于鳞癌，Ⅲ期肺癌细胞对药物的敏感性均高于Ⅰ、Ⅱ期。3.P-gp等五种耐药蛋白的表达与原代肺癌细胞对顺铂等三种化疗药物的耐药的相关性不同。P-gp、LRP与原代肺癌细胞对顺铂的耐药呈正相关，TopoⅡα与原代肺癌细胞对吉西他滨的耐药呈正相关;而GST-π、MRP与原代肺癌细胞对紫杉醇的耐药呈负相关。
　　 结论:耐药相关蛋白P-gp、MRP、LRP、GST-π、TopoⅡα在不同类型、不同分期及不同分化程度的肺癌中表达水平不同，其表达与肺癌细胞对顺铂、吉西他滨和紫杉醇的化疗敏感性的差异有关。临床上可依据耐药相关蛋白的表达，选择敏感的化疗药物。同时检测多个耐药蛋白不仅有助于揭示肺癌耐药的本质，也有助于正确制定化疗方案，增强化疗疗效，改善预后。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

一、材料

二、方法

结果

1．肺癌组织与癌旁组织中P-gp、MRP、LRP、GST-π、TopoⅡα在mRNA水平的表达

2．肺癌组织与癌旁组织中P-gP、MRP、LRP、GST-π、TopoⅡα在蛋白水平的表达

3．原代培养及细胞生存率的测定

4．P-gP、MRP、LRP、GST-π和TopoⅡα的表达与化疗耐药的相关性

讨论

结论

参考文献

综述

致谢