重组人脑利钠肽对脓毒症犬肠道粘膜核转录因子NF-κB和TNF-α、IL-6干预作用的实验研究

摘要

目的:脓毒血症是由感染引发的全身炎症反应综合症，可以引起多脏器功能衰竭(MODS)，大多是继发于重度创伤、感染及大手术后的一种临床综合征，临床上主要表现为急性肺损伤，心功能不全和肾功能衰竭，或者休克。在目前的临床诊断和治疗当中，表现的十分复杂和严重，给临床医生的工作带来很大挑战。在全身的各个脏器中，根据目前的研究结果，消化道是脓毒血症激发MODS的启动器官，也是集营养、代谢、免疫和屏障等功能于一体的多功能器官。当肠道受侵害时，肠黏膜屏障作用被破坏，肠道内细菌库细菌大量繁殖，造成肠道菌群移位，可诱发MODS的发生或加重原发疾病的损害。
　　 本文通过观察重组人脑利钠肽(rhBNP)对犬脓毒血症模型肠道粘膜组织中核因子KB(NF-κB)和细胞因子TNF-a、IL-6表达的干预作用，旨在探讨BNP对脓毒血症肠道粘膜组织中核因子KB(NF-κB)，TNF-a和IL-6的抑制作用及其作用机制，并为脓毒血症所致肠道感染的临床防治提供参考依据。
　　 方法:将实验动物健康清洁犬30只，随机分为五组，即空白对照组(A)组、高浓度rhBNP干预(B)组、标准rhBNP干预(C)组、低浓度rhBNP干预(D)组、脓毒血症模型(E)组。每组6只，对B、C、D、E组采用注射脂多糖(LPS)内毒素法建立犬脓毒血症模型，制作模型成功后予以不同剂量rhBNP干预，并于rhBNP干预前后干预前后分别采用westernblot法测NF-κB的活性，及用ELISA法检测TNF-a、IL-6的表达情况。具体过程是将犬麻醉后监测犬的生命体征，当犬的状态稳定30分钟后，经中心静脉在30分钟内注入LPSlmg/kg。各组犬于4小时，8小时，12小时，24小时时间点抽取静脉血，并于24小时后将模型犬处死。解剖犬并取肠标本，进行病理学检查，将取出的肠标本放置于零下70摄氏度低温冰箱保存，进一步用westernblot法检测NF-κB的活性表达。将各个时间点抽取的犬脓毒血症模型及使用rhBNP干预后的犬模型的静脉血经每分钟10000转的离心机离心后，使用ELISA法检测TNF-a、IL-6的活性表达情况。计量资料均以均数，标准差（(x)±s）表示，用SPSS软件分析系统处理数据，数据分析采用t检验和方差分析。
　　 结果:犬经过注射内毒素(LPS)制作成功为脓毒症模型后肠黏膜NF-κB活性及TNF-a、IL—6含量均较空白对照组明显增高(P＜0.01)，内毒素休克组肠黏膜NF-κB活性经过westernblot法检测后发现明显增强。其中TNF-a于24h时达到高峰点，IL-6含量水平持续升高至6h时间点。其肠道黏膜病理切片表现出组织坏死及水肿。而经过rhBNP干预后各干预组肠黏膜NF-κB活性及TNF-a、IL-6含量均较脓毒血症模型组明显降低(P＜0.01)，同时干预组的肠道黏膜组织病理切片表现的组织坏死及水肿较模型组肠道黏膜组织病理切片有明显改善。说明重组人脑利钠肽（rhBNP）干预后能抑制升高的NF-κB活性和TNF-a、IL-6含量。
　　 结论:1.重组人脑利钠肽（rhBNP）能减少NF-κB在脓毒症所致犬肠道组织中的表达，从而减少血液中TNF-a、IL-6的含量。
　　 2.重组人脑利钠肽(rhBNP)通过抑制NF-κB，调控炎性细胞因子的释放，能减轻脓毒症所致犬肠道的炎症程度。其保护机制与下调促炎症细胞因子和上调抑炎症细胞因子的表达有关。
　　 3.重组人脑利钠肽(rhBNP)是脓毒症休克治疗中有潜力的免疫调节物质。

目录

声明

摘要

前言

材料和方法

1 实验材料

2 实验步骤与方法

结果

3．1 肠道组织病理学变化

3．2 肠组织NF-κB水平变化表

3．3 数据分析

讨论

4．1 脓毒症及研究现状

4．2 细胞因子参与脓毒症发病机制的研究

4．3 rhBNP与脓毒症

4．4 BNP对细胞因子的干预作用

结论

参考文献

综述

致谢