厄洛替尼与化疗药物不同次序给药对NSCLC细胞的作用

摘要

目的:肺癌是引起世界范围内癌症相关死亡的主要原因，其中非小细胞肺癌(Non-smallcelllungcancer，NSCLC)约占肺癌总数的80％。以铂类为基础的联合化疗是晚期NSCLC的传统治疗方法，但疗效已达平台期。随着分子生物学的发展，表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(epidermalgrowthfactorreceptortyrosinekinaseinhibitors,EGFR-TKIs)厄洛替尼(erlotinib)在NSCLC治疗中发挥重要作用。研究显示，部分化疗药物与厄洛替尼序贯应用可提高临床疗效。EGFR基因突变型患者对厄洛替尼治疗具有良好的反应性，但NSCLC患者多数为EGFR基因野生型。对EGFR野生型患者序贯应用化疗药物与厄洛替尼是否能够临床获益，目前研究较少。本实验通过应用厄洛替尼与紫杉醇及EP方案不同次序给药，检验其对EGFR基因野生型NSCLC细胞的作用，探索对NSCLC细胞抑制作用的最佳序贯用药方案，为临床合理用药提供理论参考。
　　 方法:应用不同浓度的厄洛替尼、紫杉醇及EP（顺铂+依托泊苷）方案抑制A549与NCI-H292细胞增殖，MTT法检测两种细胞不同浓度下的吸光度，应用公式计算细胞存活率，正规机率单位法计算药物半数抑制浓度(IC50)。厄洛替尼与紫杉醇组合分为6组:对照组、厄洛替尼组(E)、紫杉醇组(T)、联合用药组(T+E)、先用紫杉醇组(T-E)、先用厄洛替尼组(E-T);厄洛替尼与EP方案组合分为6组:对照组、厄洛替尼组(E)、EP方案组(EP)、联合用药组(EP+E)、先用EP方案组(EP-E)、先用厄洛替尼组(E-EP)。MTT法检测细胞增殖，计算细胞存活率。细胞凋亡试剂盒（AnnexinV-FITC/PI）及碘化丙啶(PI)对细胞进行处理，应用流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期，Modit软件对细胞周期进行分析。
　　 结果:1.厄洛替尼、紫杉醇及EP方案抑制A549及NCI-H292细胞生长的作用呈现浓度依赖性，随着药物浓度的提高细胞抑制率逐渐增加。
　　 2.A549细胞联合用药组及序贯用药组对细胞的抑制作用均强于单药组(P＜0.05)，其中T-E组及EP-E组较联合用药组及先用厄洛替尼组相比细胞存活显著减少(P＜0.05);NCI-H292细胞联合用药组对细胞的抑制作用强于单药组(P＜0.05)，但序贯用药组细胞抑制率与单药组相比无明显差别(P＞0.05)。
　　 3.T-E及EP-E组A549细胞凋亡率显著高于单药组(P＜0.05)，E-T组较T组细胞凋亡减少(P＜0.05)，E-EP组可减少EP组诱导的细胞凋亡(P＜0.05)。
　　 4.T-E及EP-E组可使A549细胞G2/M期阻滞增加，E-T及E-EP组使细胞阻滞于G0/G1期。
　　 结论:1.化疗药物与厄洛替尼序贯应用效果与细胞株种类及其生物学背景相关。
　　 2.先用紫杉醇后用厄洛替尼及先用EP方案后用厄洛替尼是最佳给药方案。
　　 3.先用化疗药物后用厄洛替尼具有较强抗肿瘤效应的机理可能与厄洛替尼抑制化疗后肿瘤细胞的损伤修复而抑制细胞增殖，以及增强化疗药的促凋亡作用有关。

目录

声明

摘要

前言

材料和方法

一、实验材料

二、实验方法

结果

一、A549及NCI-H292的细胞生长曲线

二、厄洛替尼、紫杉醇及PE方案对A549及NCI-H292细胞的IC50

三、厄洛替尼、紫杉醇及PE方案不同次序给药对细胞存活率的影响

四、厄洛替尼、紫杉醇及PE方案不同次序给药对细胞凋亡的影响

五、厄洛替尼、紫杉醇及PE方案不同次序给药对细胞周期的影响

讨论

结论

参考文献

综述

附录

致谢