蓝萼香茶菜二萜类物质抗凝血作用机制的研究

摘要

目的:
　　 通过对蓝萼香茶菜中二萜类物质含量及蓝萼甲素含量的测定筛选提取工艺，确定最佳提取工艺，考察蓝萼香茶菜中二萜类物质抗凝血作用机制。
　　 方法:
　　 以冬凌草甲素为对照品。采用紫外分光光度法测定，根据蓝萼香茶菜二萜类物质含量筛选提取工艺。采用RP-HPLC法测定蓝萼香茶菜中蓝萼甲素含量。采用急性毒性实验，测定小鼠对总二萜的LD50。通过测定小鼠的毛细管凝血时间和尾尖出血时间;大鼠的凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)活化部分凝血激酶时间(APTT)和血浆复钙时间(PRT)，考察蓝萼香茶菜二萜类物质体内抗凝血作用机制。通过花生四烯酸（AA）和ADP诱导的血小板聚集试验，测定二萜类物质蓝萼甲素对新西兰兔体外血小板致聚的作用。
　　 结果:
　　 加热回流方法提取蓝萼香茶菜总二萜最多，每克生药中总二萜毫克含量为20.782mg·g-1，综合考虑提取方法的提取效率、毒性、成本、灌胃性状等因素，提取方法最佳的是加热回流法;小鼠灌胃给药LD50为1.090mg·kg-1，最佳实验剂量应小于0.25mg·kg-1;蓝萼香茶菜总二萜高、中、低剂量能延长小鼠的出血时间，延长百分率分别为88.5％、62.3％、22.3％;而且能延长小鼠的凝血时间，延长百分率分别为96.5％，76.8％，42.8％;并且显著延长大鼠TT、APTT和PRT。蓝萼甲素能有效抑制AA作用的血小板聚集，抑制作用与剂量的二次方成正比，当浓度大于0.01mg·mL-1时能完全抑制血小板聚集;蓝萼甲素能有效抑制ADP作用的血小板聚集，抑制作用与剂量的三次方成正比，当浓度大于2mg·mL-1时能完全抑制血小板聚集。
　　 结论:
　　 蓝萼香茶菜二萜类物质有抗凝血作用。

目录

声明

摘要

前言

1．1 人类心血管疾病的现状

1．2 心脑血管疾病发病机制

1．3 治疗和预防心脏脑血管疾病的药物

1．4 蓝萼香茶菜(Rabdosiajaponica)药理学作用研究进展

1．5 本课题研究内容

(二)材料和仪器

2．1 药品

2．2 动物

2．3 仪器

(三)实验方法和结果

3．1 蓝萼香茶菜二萜类物质含量测定

3．2 蓝萼香茶菜总二萜提取

3．2．1 加热回流法1

3．2．2 加热回流法2

3．2．3 冷浸法

3．3 蓝萼香茶菜总二萜含量的测定

3．3．1 对照品溶液的配制

3．3．2 供试品溶液的配制及测定方法

3．3．3 标准曲线的绘制

结果

3．4．1 标准曲线

3．4．2 提取工艺对蓝萼香茶菜干燥品中总二萜含量的影响

讨论

(四)蓝萼香茶菜总二萜中蓝萼甲素含量测定

4．1 测定方法

4．1．1 色谱条件

4．1．2 溶液的制备

4．1．3 线性关系考察

4．1．4 精密度试验

4．1．5 重现性试验

4．1．6 稳定性试验

4．1．7 加样回收率实验

4．1．8 三种方法提出的蓝萼香茶菜总二萜中蓝萼甲素含量测定

结果

4．2．1 色谱结果

4．2．2 线性关系考察

4．2．3 三种方法提出的蓝萼香茶菜中蓝萼甲素含量测定

讨论

(五)蓝萼香茶菜总二萜急性毒性实验

5．1 急性毒性实验

结果

5．3 讨论

(六)蓝萼香茶菜二萜类抗凝血作用的研究

6．1 动物体内实验

6．1．1 小鼠凝血时间的测定

6．1．2 小鼠尾尖出血时间的测定

6．1．3 大鼠凝血功能的测定

6．2 动物体外实验

6．2．1 蓝萼甲素体外抗兔血小板聚集的测定

6．3 统计学处理

6．4 结果

6．4．1 对小鼠尾尖出血时间的影响

6．4．2 对小鼠凝血时间的影响

6．4．3 对大鼠凝血功能的影响

6．4．4 蓝萼甲素对AA诱导的血小板聚集作用的结果

6．4．5 蓝萼甲素对ADP诱导的血小板聚集作用的结果

6．5 讨论

结论

参考文献

综述

攻读学位期间发表论文情况

致谢