Aurora A和ERK通路在口腔黏膜扁平苔藓及其恶变组织中差异表达的研究

摘要

目的:
　　口腔鳞状细胞癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率高，严重威胁着人类的健康。目前口腔鳞状细胞癌的根治方法主要依靠外科手术切除，但口腔鳞癌易出现早期转移，术后生存率不高，预后较差。近几年来随着肿瘤分子生物学的发展，使研究人员更多的从口腔癌发生的分子机制入手，来探讨口腔癌的发生、发展以及转移的原因。肿瘤的基因诊断及靶向治疗逐渐成为广大科研工作者研究的热点。大量研究表明，口腔鳞癌的发生发展是细胞增殖与细胞凋亡之间的平衡遭到破坏的结果，涉及癌基因的激活、抑癌基因失活、细胞周期异常以及细胞凋亡障碍等机制。信号转导通路则进一步阐明蛋白质的功能，以及蛋白与蛋白之间，蛋白与基因之间是如何相互作用，将刺激信号从细胞外传入细胞内，最终引发细胞的生物学效应。
　　Ras/Raf/Mek/ERK信号级联反应是一个小GTP结合蛋白活化的胞浆蛋白激酶级联反应，是众多“MAPK”通路中的一条。Ras在细胞外信号刺激下，转化为激活型Ras，活化后的Ras磷酸化Raf，活化后的Raf再激活Mek，Mek经磷酸化后激活ERK，活化后的ERK进入细胞核，激活转录因子，进而导致基因的改变，引发细胞的生物学效应。借此级联反应，将信号由细胞膜表面受体传递至转移因子，该通路最终通过调控基因表达来控制细胞的生物学行为。根据细胞外刺激信号和细胞类型的不同，Ras/Raf/Mek/ERK信号通路能够调控细胞周期或凋亡。研究证实，Ras/Raf/Mek/ERK信号通路的过度活化与肿瘤的发生发展密切相关。其中蛋白质的磷酸化与去磷酸化与信号通路的活化关系最为紧密。蛋白质经过活化位点的磷酸化而具有活性，进而逐级向下活化下游靶蛋白;而未经活化的蛋白处于失活状态，在信号转导过程中不发挥作用。因此，检测癌前病变恶变早期磷酸化蛋白的变化情况比检测总蛋白的表达，对口腔鳞癌早期诊断更有现实意义。
　　关于口腔扁平苔藓恶变的研究目前主要集中于探讨OLP与OSCC组织之间的蛋白质表达差异。在本项研究中，我们探讨了OLP黏膜组织和由OLP转变而来的OSCC组织之间的蛋白表达差异，并着重研究了磷酸化蛋白的表达。我们通过检测Aurora A、pRaf-1(S259)、ERK1/2和pERK1/2(T202/Y204)在上述两种组织中的表达，来进一步探索OLP恶变的发生机制，为OSCC临床早期诊断提供新的思路，并为细胞靶向药物治疗提供理论依据。
　　材料和方法:
　　本研究选取大连医科大学附属第一医院病理科临床石蜡包埋组织共计77例，其中OLP患者71例，由OLP恶变而来的OSCC患者6例。采用免疫组织化学法S-P法，检测OLP组织以及OSCC组织中AuroraA、pRaf-1、ERK1/2和pERK1/2蛋白的分布特点及表达情况，比较了这4种蛋白在OLP及OSCC组织中的表达差异。实验数据应用SPSS13.0软件进行统计学分析。免疫组化阳性率的比较采用X2检验。
　　结果:
　　AuroraA蛋白主要表达部位为上皮细胞的细胞质，在OLP病例中有23例表达阳性(32％)，同时在OSCC组织中有6例(100％)表达阳性，OSCC组的AuroraA阳性表达率显著高于OLP组，两组间有统计学差异(P=0.005)。
　　pERK1/2(T202/Y204)在OLP上皮组织中，pERK1/2(T202/Y204)蛋白的阳性染色占21％(15/71)。而pERK1/2(T202/Y204)蛋白的阳性表达在OSCC患者中占100％(6/6)。pERK1/2(T202/Y204)的阳性染色主要集中于细胞核。在OLP患者中pERK1/2(T202/Y204)蛋白的表达显著地低于OSCC患者组(P=0.003，P＜0.05)。
　　pRaf-1(S259)蛋白在OLP病例中阳性表达率为46例(65％)，同时25例(35％)表达为阴性。在OSCC病例中pRaf-1(S259)的阳性表达率为67％，2例OSCC(33％)表达为阴性。经统计学分析，OLP组和OSCC组的pRaf-1(S259)蛋白表达无统计学差异(P=0.325，P＞0.05)。ERK1/2蛋白的阳性染色为深褐色。该蛋白主要在上皮细胞的细胞质中表达。在66％(47/71)的OLP组织中ERK1/2蛋白表达阳性，在OSCC患者中该蛋白的阳性表达占67％(4/6)。ERK1/2蛋白在OLP组和OSCC组的表达没有显著差异(P=0.715，P＞0.05)。
　　结论:
　　AuroraA和ERK通路可能参与了OLP恶变的发生过程;AuroraA高表达以及大于50％阳性率的pERK1/2高表达对于预警OLP恶变具有一定的提示性。

目录

声明

摘要

前言

材料和方法

1．研究对象

2．主要仪器

3．主要试剂

4．免疫组化操作方法

5．免疫组化结果评价方法

6．统计学分析

结果

1．AuroraA在OLP及OSCC组织中的表达分布情况

2．pRaf-1在OLP及OSCC组织中的表达分布情况

3．ERK1／2在OLP及OSCC组织中的表达分布情况

4．pERK1／2在OLP及OSCC组织中的表达分布情况

讨论

结论

参考文献

综述 口腔扁平苔藓恶变机制的研究进展

附录

致谢