肾间质纤维化中周细胞核心岩藻糖基化修饰特征

摘要

背景:慢性肾脏病(Chronic Kidney Disease，CKD)影响超过全球10％人口的健康，带来巨大的经济和健康负担。肾间质纤维化是慢性肾脏病进展的共同病理表现，而肌成纤维细胞增多是导致肾间质纤维化的核心事件。关于肌成纤维细胞的来源一直存在争议，新近有学者运用遗传命运示踪技术发现，周细胞是肌成纤维细胞的主要来源。周细胞与血管内皮细胞及肾小管上皮细胞间存在对话机制，如TGF通路、PDGF通路、VEGF通路等，形成了复杂的信号交互网络。另有学者研究发现，这些对话机制中的关键受体蛋白均受到核心岩藻糖基化的修饰，核心岩藻糖基化可能在这些信号网络中发挥着重要作用。
　　目的:探讨周细胞核心岩藻糖基化在肾间质纤维化中的作用。
　　方法:我们选取了2015年1月至2015年12月32例肾活检确诊为IgA肾病的患者，观察患者临床指标，肾间质核心岩藻糖基化水平及肾间质周细胞脱离、转分化的变化情况，并进行相关性分析。体外研究我们建立了原代肾脏周细胞分离培养技术平台，即采用PDGFRβ标记C57BL6小鼠肾脏周细胞，利用无菌流式分选和磁珠分选出周细胞，并对分选后的细胞进行培养及鉴定。采用TGFβ1刺激周细胞，建立体外周细胞-肌成纤维细胞转分化模型，进一步观察TGFβ1刺激24h，48h后周细胞TGFβ、PDGF通路关键蛋白的核心岩藻糖基化水平变化及向肌成纤维细胞转分化情况。体内研究我们采用单侧输尿管梗阻(UUO) C57BL/6小鼠肾间质纤维化模型，观察UUO模型1、3、7天中周细胞核心岩藻糖基化水平变化及周细胞从微血管脱离、向肌成纤维细胞转分化等情况。体外采用FUT8siRNA瞬时转染周细胞，降低周细胞核心岩藻糖基化水平，观察其对周细胞转分化的影响。体内采用FUT8shRNA腺病毒尾静脉注射，降低体内核心岩藻糖基化水平，观察其对周细胞脱离、转分化及肾间质纤维化的影响。
　　结果:在不同牛津分型的IgA肾病的患者中，观察到肾间质周细胞脱离内皮细胞、转分化为肌成纤维细胞及周细胞核心岩藻糖基化水平升高。在体外周细胞转分化模型中发现，周细胞在24h即开始出现α-SMA表达，48hα-SMA表达明显增多，同时伴随着核心岩藻糖基化水平的增高。在小鼠UUO模型中我们观察到随输尿管梗阻时间的延长，肾间质纤维化程度逐渐加重，同时发现核心岩藻糖基化水平呈现逐渐升高趋势，以及周细胞脱离内皮细胞转分化为肌成纤维细胞。而在抑制体外及体内的核心岩藻糖基化水平后，发现UUO模型中肾间质纤维化明显减轻，而周细胞脱离及转分化也明显降低。
　　结论:通过体内、体外及临床研究，我们发现在肾间质纤维化过程中核心岩藻糖基化对周细胞-肌成纤维细胞转分化具有重要的调控作用，这一结果可能与对周细胞TGFβ，PDGF信号通路活化的抑制有关。这可能为治疗慢性肾脏病肾间质纤维化的提供一个潜在的干预靶点及治疗新思路。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 IgA肾病患者周细胞核心岩藻糖基化变化特征

(二)材料和方法

1．主要试剂与材料

2．方法

(三)结果

(四)讨论

(五)结论

参考文献

第二部分 核心岩藻糖基化调控周细胞转分化体内及体外研究

(二)材料与方法

1．主要试剂与材料

2．方法

(三)结果

(四)讨论

(五)结论

参考文献

综述 肾脏纤维化形成机制的研究进展

攻读学位期间发表的文章

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