嘧啶类BTK抑制剂的制备及其抗慢性B淋巴细胞白血病的初步药理活性研究

摘要

目的:
　　设计合成一系列2，4-二芳基嘧啶类布鲁顿氏酪氨酸蛋白激酶(BTK)抑制剂，通过初步评价其对慢性B淋巴细胞白血病的抗肿瘤活性，以筛出活性更好、毒性更低更加优良的化合物。
　　方法:
　　本论文的第一部分以BTK抑制剂Spebrutinib为先导化合物，基于分子杂合策略，在其二苯胺基嘧啶骨架的C-2位引入氨基片段，制备一系列新型的2，4-二芳基嘧啶类小分子化合物，共计12个新型化合物;并借助1HNMR、13CNMR、HRMS、MS对目标分子进行结构鉴定。第二部分以Spebrutinib和Ibrutinib作为阳性对照药，在激酶水平上，通过定量分析酶促反应后剩余的ATP含量来测定BTK酪氨酸激酶半数抑制率(IC50);在体外肿瘤细胞筛选中，采用CCK-8比色法，选取BTK高表达的人源B淋巴瘤细胞Ramos和Raji，测定了目标分子在48h作用下对肿瘤细胞的抑制率IC50值;并采用AO/EB双染法进行染色，考察最优的化合物对肿瘤细胞Ramos的抑制效果;提取正常外周血单个核细胞(PBMC)，检测最优化合物对正常免疫细胞的毒性作用;以流式细胞术考察最优化合物对B淋巴瘤细胞的凋亡作用以及对细胞周期的作用机制。
　　结果:
　　第一部分合成纯化获得12个目标分子，并且核磁数据与目标分子结构特征一致，高分辨质谱特征与目标分子分子质量一致。第二部分化合物初步活性测试结果显示，合成的目标分子大多具有良好的抗肿瘤活性，其中D12具有较优的抑制BTK激酶活性，IC50为0.23nM;同时，化合物D10对Ramos细胞和Raji细胞具有很好的活性，IC50分别为10.5μM、19.1μM;AO/EB荧光染色结果显示，与空白组相比，给予化合物D10处理后肿瘤细胞数目明显减少，出现凋亡，细胞核发生固缩;毒性试验中，最优化合物D10对正常外周血单个核细胞(PBMC)几乎没有毒性作用;流式细胞术考察最优化合物D10对B淋巴瘤细胞Ramos的凋亡具有显著的提高，同时将细胞周期抑制了在G0/G1阶段。
　　结论:
　　本研究成功合成得到嘧啶类衍生物;抗肿瘤药理活性初步研究揭示太多数合成化合物具有较强的抑制肿瘤细胞增殖的活性，部分化合物如D10的抑制BTK激酶活性及抑制肿瘤细胞活性要优于阳性对照化合物Spebrutinib，可以作为候选化合物进行更进一步的开发。本文的结构修饰表明:对二苯胺基嘧啶骨架左侧氨基侧链进行结构优化能有效改善药物抗肿瘤活性及毒性，为此类分子的结构优化提供构效关系理论基础。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 嘧啶类BTK抑制剂的合成

1．设计背景

2．目标化合物的合成路线

3．目标化合物的合成

3．1 主要实验试剂与仪器

3．2 实验操作步骤

3．3 化合物的结构鉴定

第二部分 目标化合物的药理活性研究

1．材料

2．方法

结果

3．1 BTK激酶活性抑制实验

3．2 体外细胞增殖抑制实验

3．3 细胞毒性检测

3．4 AO／EB染色实验

3．5 流式细胞仪检测

讨论

4．1 目标分子与BTK激酶作用关系模拟分析

4．2 目标分子结构与药效关系分析

结论

参考文献

综述 布鲁顿氏酪氨酸蛋白激酶(BTK)抑制剂在慢性淋巴细胞白血病治疗中的研究进展

附录

攻读学位期间发表论文情况

致谢