影响根癌农杆菌介导水稻化因素的研究

摘要

通过报告基因的导入,优化各种参数,从而建立起良好的转化体系,为今后利用该体系导各市县益的外源基因尊定基础.对各种基因型愈伤组织诱导频率的研究结果表明,由成熟用胚盾片诱导愈伤组织频率较高的基因型是中花-8(籼稻),铁8773(籼稻)和明辉63(粳稻).对培养基与水稻愈伤组织分化能力之间的关系的研究表明在培养基中加入水解酪蛋白300mg/l和脯氨酸2g/l,有提高诱导频率、改善愈伤组织状态的作用.

目录

Abstract

前言

1.文献综述

1.1引言

1.1.1基因的克隆与分离路线

1.1.1基因的修饰

1.1.3植物转基因技术

1.1.4转基因植株后代的筛选

1.2基因工程在水稻改良方面的研究

1.2.1抗病虫性改良

1.2.2抗逆性改良

1.2.3品质性状改良

1.3农杆菌介导的植物基因转化研究进展

1.3.1农杆菌介导的基因转化机理

1.3.2植物对农杆菌侵染的反应

1.3.3转基因的遗传表达

1.4转基因植物可能存在的风险

1.4.1对人和动物健康的风险

1.4.2对生态环境的风险

2材料与方法

2.1实验材料

2.1.1植物材料

2.1.2供试菌株及质

2.1.3重要仪器设备

2.1.4重要试剂

2.1.5培养基

2.2实验方法

2.2.1水稻愈伤组织的诱导、分化和再生

2.2.2根癌农杆菌的转化

2.2.3水稻抗性愈伤组织的筛选

2.2.4抗性植株的再生

2.2.5 GUS活性的组织化学染色检测

2.2.6转基因植株的分子鉴定

3结果与分析

3.1各种基因型愈伤组织诱导频率

3.2培养基对籼稻愈伤组织分化能力的影响

3.3快速高效的水稻再生体系的获得

3.4籼、粳稻对hygB的敏感性实验

3.5抗性克隆的获得

3.5.1根癌农杆菌稀释液对转化频率的影响

3.5.2酚类化合物和单糖对根癌农杆菌转化频率的影响

3.6Hyg B对植株的再生影响

3.7 GUS组织化学检测

3.8转基因水稻植株的分子鉴定

3.8.1PCR检测

3.8.2PCR-Southern检测

3.8.3Southern blot检测

4讨论

4.1转化受体材料对转化频率的影响

4.2根癌农杆菌菌株对转化频率的影响

4.3根癌农杆菌稀释液对转化频率的影响

4.4酚类化合物和单糖对转化频率的影响

参考文献

附图

致谢