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第一章基因工程控制植物育性的研究综述
1人工控制植物育性的遗传基础
1.1核育性因子
1.2质育性因子
2基因工程控制植物育性
2.1特异启动子及特殊基因的分离
2.2人工创建三系策略的完善
3结语
参考文献
第二章转基因雄性不育烟草的获得和温度敏感性研究
1材料和方法
1.1植物材料
1.2 PCR引物
1.3 A6、A9启动子的克隆
1.4 A6-Barnase和A9-Barnase嵌合基因载体的构建
1.5雄性不育基因植物表达载体的改造
1.6烟草的遗传转化与再生
1.7 Southern 杂交
1.8抗除草剂检测
1.9育性检测
1.10温度敏感性实验
2结果与分析
2.1 A6，A9启动子的克隆及序列分析
2.2雄性不育植物表达载体的获得
2.3转基因雄性不育烟草的获得
2.4 Barnase基因在花药中的特异表达
2.5 Barnase嵌合基因表达的高温不稳定性
3讨论
参考文献：
第三章棉花花粉特异基因5’调控区的功能研究
1材料与方法
1.1菌株和载体
1.2材料
1.3PCR引物
1.4启动子的克隆与表达载体构建
1.5 GUS基因瞬时表达活性的检测
1.6烟草的遗传转化
1.7转化子的分子生物学鉴定
1.8转基因烟草的生物学鉴定
2结果与分析
2.1G9启动子的序列分析
2.2 pDGG和pCGG重组载体的获得
2.3 G9-GUS融合基因的瞬时表达
2.4 G9-GUS融合基因的定位表达及转基因烟草的获得
3讨论
参考文献
第四章核糖核酸酶抑制蛋白的表达及其在转基因棉花筛选中的应用
前言
1重组蛋白的表达系统的选择
1.1几种蛋白表达系统和表达形式的介绍
1.2 大肠杆菌的表达系统和表达形式
2.利用PET30(A)融合表达体系表达BARSTAR蛋白
2.1大肠杆菌pET30(a)融合表达体系
2.2 Barstar蛋白的性质和用途
3重组蛋白的纯化
3.1细胞的破碎
3.2重组蛋白的纯化
实验部分
1材料和方法
2结果与讨论
参考文献
第五章G9-BARNASE引起的隐性核雄性不育及保持系植物表达载体的构建
1材料与方法
1.1菌株和载体
1.2植物材料
1.3 PCR反应鉴定转基因植株
1.4 PCR反应克隆三价启动子和共转化植株的鉴定
1.5隐性核不育植物表达载体(pCGN)的构建
1.6三价超启动子恢复基因克隆载体的构建
1.7保持系植物表达载体的构建
1.8农杆菌CGN介导的烟草遗传转化
1.9农杆菌pCNS和pTN共同介导的烟草遗传转化
1.10 pCGN转化子的分子生物学鉴定
1.11共转化转化子的分子生物学鉴定
1.12转基因烟草的生物学鉴定
2结果与分析
2.1 pCGN重组克隆的获得
2.2 G9-Barnase融合基因的定位表达及转基因烟草的获得
2.3保持系植物表达载体pCNS的获得及转基因烟草的获得
3讨论
参考文献
第六章实验技术和方法汇总
一.烟草(NICOTIANA TABACCUM)、棉花(GOSSYPIUM SPP)、菌种、质粒、分子标记和试剂
二.质粒的提取
三.质粒的酶切和连接方法
四.核酸的琼脂糖凝胶电泳及DNA片段回收
五.大肠杆菌感受态细胞的制备和转化
六.农杆菌感受态细胞的制备和转化
七.三亲交配转化农杆菌
八.克隆的筛选
九.植物转化(叶盘法)及转基因植株管理
十.植物基因组DNA的提取
十一.SOUTHERN BLOTTING
十二.ELISA分析
十三.超声裂解细胞壁
十四.亲和层析
十五.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳
十六.WESTERN BLOTTING分析
十七.动物免疫血清制备
十八.基因枪转化法
十九.GUS基因组织化学染色法
二十.ALEXENDER花粉染色法
二十一.细菌基因组DNA提取
参考文献
结论
创新点
博士生在读期间论文发表情况
致谢
