不同培养方式长期扩增神经干细胞的比较

摘要

神经干细胞的体外培养方式有神经球悬浮培养和单层贴壁培养两种.为寻求适合体外大规模扩增的培养方式,本研究对悬浮和单层贴壁方式培养的神经干细胞进行了系统的比较.首先从E14小鼠胚胎前脑组织中获得了细胞,经AccutaseTM消化和机械吹打后形成单细胞悬液,分别以悬浮和单层的方式进行培养.经诱导分化和免疫荧光鉴定,两种培养方式培养的细胞均为神经干细胞.此外,本文还确定了悬浮培养的神经球在直径200μm时进行传代为传代的合适时机.进一步阐明了悬浮和单层培养方式所培养的神经干细胞在增殖能力及异质性等方面都存在着差异.对于体外大规模扩增神经干细胞而言,悬浮培养方式要优于单层贴壁培养方式.

目录

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独创性说明

引 言

1文献综述

1.1神经干细胞在体内可能的位点

1.2神经干细胞的生物学特性

1.2.1神经干细胞的产生和迁移

1.2.2神经干细胞的可塑性

1.2.3神经干细胞特性的维持

1.2.4神经干细胞在体内的细胞表型

1.2.5体外培养的神经干细胞的细胞表型

1.3神经干细胞的鉴定

1.3.1神经干细胞的标志物Nestin

1.3.2神经干细胞的其他标志物

1.4神经干细胞的分离

1.5神经干细胞的体外培养

1.5.1神经球及其内部细胞的异质性

1.5.2单层方法培养神经干细胞

1.6神经干细胞研究的展望

2神经干细胞的获得及体外培养

2.1实验材料与方法

2.1.1实验动物

2.1.2实验药品及试剂

2.1.3实验所需溶液和试剂的配制

2.1.4实验仪器

2.1.5原代取材

2.1.6原代接种

2.1.7神经干细胞传代操作及继代培养

2.1.8悬浮培养神经干细胞传代时机的确定

2.1.9神经干细胞的免疫组织化学鉴定

2.1.10诱导分化及免疫组织化学

2.2实验结果与讨论

2.2.1神经干细胞原代和继代悬浮及单层培养

2.2.2悬浮培养神经干细胞传代时机的确定

2.2.3神经干细胞诱导分化及免疫荧光鉴定

2.2结论

3不同培养方式长期扩增神经干细胞的比较

3.1实验材料与方法

3.1.1实验动物与药品试剂

3.1.2实验仪器

3.1.3 Hoechst33342/PI荧光染色

3.1.4免疫荧光

3.1.5生长曲线的测定

3.1.6流式细胞分析

3.2结果与讨论

3.2.1不同培养方式细胞生长状态的比较

3.2.2不同培养方式细胞增殖能力的比较

3.2.3不同培养方式细胞异质性的比较

3.3结论

4总结论

参考文献

攻读硕士学位期间发表学术论文情况

致 谢

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