消敏颗粒抗Ⅰ型超敏反应的实验研究

摘要

目的: 研究消敏颗粒抗皮肤、全身Ⅰ型超敏反应的作用并探讨其机制，为临床应用消敏颗粒治疗荨麻疹等Ⅰ型超敏反应性疾病提供理论依据。 方法: 本实验分三部分进行消敏颗粒抗Ⅰ型超敏反应的研究。首先，进行消敏颗粒抗皮肤Ⅰ型超敏反应的研究，包括利用组胺、5-羟色胺所致小鼠毛细血管通透性增高实验和小鼠耳异种被动皮肤超敏反应(PCA)模型，研究消敏颗粒对组胺及5-羟色胺所致小鼠毛细血管通透性增高、PCA以及足跖肿胀的影响。其次，进行消敏颗粒抗全身Ⅰ型超敏反应的研究，包括利用Compound48/80致小鼠休克及抗原所致豚鼠过敏性休克模型，研究消敏颗粒对动物过敏性休克的影响。最后，对消敏颗粒抗Ⅰ型超敏反应的机制进行探讨，包括消敏颗粒对大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒的影响；荧光测定改良法检测消敏颗粒对大鼠肥大细胞释放组胺的影响；免疫组化法检测消敏颗粒对大鼠肥大细胞释放5-羟色胺的影响；ELISA法检测消敏颗粒对致敏大鼠血清IgE含量的影响；ELISA法检测消敏颗粒对致敏大鼠血清中细胞因子IFN-γ、IL-4的含量的影响；RT-PCR方法检测消敏颗粒对致敏大鼠脾淋巴细胞的IFN-γmRNA、IL-4mRNA表达的影响；透射电镜观察消敏颗粒对脾组织T细胞、培养脾T细胞凋亡的影响；流式细胞术检测消敏颗粒对血T细胞凋亡的影响。 结果:1.消敏颗粒对组胺致小鼠毛细血管通透性增高的影响：结果表明，消敏颗粒对组胺致小鼠毛细血管通透性增高有抑制作用，各剂量组与对照组比较均有显著性差异(低剂量组P＜0.05，中、高剂量组P＜0.01)，消敏颗粒低、中、高剂量组呈现明显的量效关系。 2.消敏颗粒对5-羟色胺致小鼠毛细血管通透性增高的影响：结果表明，消敏颗粒对5-羟色胺致小鼠毛细血管通透性增高有抑制作用，各剂量组与对照组比较均有显著性差异(P＜0.01)。 3.消敏颗粒对小鼠耳异种被动皮肤超敏反应(PCA)的影响：结果表明，消敏颗粒各组PCA均明显减轻，与对照组比较均有显著性差异(P＜0.01)。 4.消敏颗粒对组胺所致小鼠足跖肿胀的影响：结果表明，低剂量组在注射后30min时有一定抑制作用(P＜0.05)，以后随着时间的延长，作用逐渐减弱。中剂量组和高剂量组在本实验范围内的各时间段均可显著抑制足跖肿胀。 5.消敏颗粒对Compound48/80致小鼠休克的影响：结果表明，可导致小鼠休克、死亡，消敏颗粒可以降低其死亡率，高剂量组效果较明显，与模型组比较，有显著性差异(P=0.05)。 6.消敏颗粒对抗原所致豚鼠过敏性休克的影响：结果表明，消敏颗粒各组均可延缓其发敏时间，与模型组比较，均有显著性差异(P＜0.01)。 7.消敏颗粒对大鼠血清IgE生成的影响：结果表明，消敏颗粒可抑制IgE的分泌，各剂量组与模型组比较均有显著性差异(P＜0.01)。 8.消敏颗粒对大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒的影响：结果表明，与正常组比较，各实验组肥大细胞脱颗粒均增多，差异显著。消敏颗粒各组与模型组比较，均可减少肥大细胞脱颗粒，差异有显著意义(P＜0.01)。 9.消敏颗粒对大鼠腹腔肥大细胞释放组胺的影响：结果表明，消敏颗粒各组与模型组相比，大鼠腹腔肥大细胞组胺的释放量均明显降低(P＜0.01)，消敏颗粒高剂量组与扑尔敏组肥大细胞组胺的释放量均低于低剂量组，差异有显著意义(P＜0.01)。 10.消敏颗粒对大鼠腹腔肥大细胞释放5-羟色胺的影响：结果表明，消敏颗粒各组部分腹腔肥大细胞颗粒脱失，5-羟色胺表达减弱。对细胞进行综合积分可见，消敏颗粒各组均明显高于模型组，差异有显著性意义(P＜0.01)。 11.消敏颗粒对大鼠血清IFN-γ、IL-4含量的影响：结果表明，消敏颗粒各组大鼠血清IFN-γ含量有增加的趋势，其中以消敏颗粒高剂量组增加更明显，与模型组比较，差异有显著意义(P＜0.01)。消敏颗粒各组大鼠血清IL-4含量降低，其中以消敏颗粒高剂量组降低明显，与模型组比较，差异有显著意义(P＜0.01)。消敏颗粒组IFN-γ/IL-4高于模型组，差异有显著意义(P＜0.01)。 12.消敏颗粒对大鼠脾IFN-γmRNA、IL-4mRNA表达的影响：琼脂糖电泳结果表明，消敏颗粒组和扑尔敏组IFN-γDNA经扩增后可见光亮的条带，消敏颗粒高剂量组和扑尔敏组强于其它组。模型组IL-4DNA扩增后其亮度强于正常组和各用药组，正常组条带最暗。相对表达量结果表明，消敏颗粒高剂量组大鼠脾组织IFN-γmRNA的表达增加明显，与模型组比较差异有显著意义(P＜0.01)。大鼠脾组织IL-4mRNA的表达模型组显著高于正常组(P＜0.01)，消敏颗粒高剂量组表达显著降低(P＜0.01)。 13.透射电镜观察消敏颗粒对脾组织T细胞凋亡的影响结果：结果表明，消敏颗粒组可见到脾T淋巴细胞早期凋亡表现和典型的凋亡小体。 14.透射电镜观察消敏颗粒对脾T细胞凋亡的影响结果：结果表明，模型组的脾T淋巴细胞的结构多趋于正常，发生明显凋亡的细胞较少，偶见坏死脾T淋巴细胞。消敏颗粒组脾T淋巴细胞发生明显的凋亡。 15.流式细胞仪检测消敏颗粒对外周血T细胞凋亡的影响结果：结果表明，消敏颗粒组T淋巴细胞凋亡量明显增加。消敏颗粒组与模型组比较，T淋巴细胞凋亡百分率差异有显著性(P＜0.01)。 结论: 1.消敏颗粒具有抑制皮肤Ⅰ型超敏反应的作用：能抑制组胺及5-羟色胺致小鼠毛细血管通透性增高；能抑制小鼠异种皮肤被动过敏反应；对组胺所致小鼠足跖肿胀具有抑制作用。 2.消敏颗粒具有抑制全身Ⅰ型超敏反应的作用：能降低Compound48/80所致小鼠过敏性休克的死亡率；可以延缓抗原所致豚鼠发敏时间，高剂量组可降低死亡率。 3.消敏颗粒具有减少肥大细胞脱颗粒；减少组胺和5-羟色胺的释放；降低血清总IgE含量：增加大鼠血清IFN-γ含量，降低IL-4含量，促进IFN-γmRNA表达，抑制IL-4mRNA表达，使Th1/Th2比例上调；诱导T淋巴细胞凋亡等作用。 消敏颗粒不仅可以通过抑制IgE生成，减少肥大细胞等效应细胞释放生物活性介质拮抗Ⅰ型超敏反应，而且可能通过调节Th1/Th2亚群之间的免疫平衡、诱导T淋巴细胞凋亡等作用机制发挥抗Ⅰ型超敏反应作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：中英文名词术语

前言

第一部分消敏颗粒抗皮肤I型超敏反应的研究

1材料与方法

1.1实验材料

1.2实验方法

1.3统计学方法

2结果

2.1消敏颗粒对组胺致小鼠毛细血管通透性增高的影响结果

2.2消敏颗粒对5-羟色胺致小鼠毛细血管通透性增高的影响结果

2.3消敏颗粒对小鼠耳异种被动皮肤超敏反应的影响结果

2.4消敏颗粒对组胺所致小鼠足跖肿胀的影响结果

3讨论

4结论

参考文献

第二部分消敏颗粒抗全身Ⅰ型超敏反应的研究

1材料与方法

1.1实验材料

1.2实验方法

1.3统计学方法

2结果

2.1消敏颗粒对Compound48/80致小鼠休克的影响结果

2.2消敏颗粒对抗原所致豚鼠过敏性休克的影响

3讨论

4结论

参考文献

第三部分消敏颗粒抗Ⅰ型超敏反应机制探讨

实验一消敏颗粒对IgE生成的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

4结论

参考文献

实验二消敏颗粒对肥大细胞脱颗粒及其释放生物活性介质的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

4结论

参考文献

实验三消敏颗粒对大鼠IFN-γ、IL-4及其基因表达的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

4结论

参考文献

实验四消敏颗粒对T细胞凋亡的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

4结论

参考文献

全文总结

结论

展望

致谢

文献综述 中医药抗Ⅰ型超敏反应的研究进展

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