Bim和PI3K/AKT在低温致乳鼠心肌细胞损伤中的作用

摘要

目的:
　　 探讨低温对心肌细胞凋亡率、乳酸脱氢酶活性变化的影响,以及促凋亡蛋白Bim和信号通路PI3K/AKT在低温处理后心肌细胞中的表达和作用。
　　 方法:
　　 1.取健康乳鼠(出生1-3d)心脏,利用0.08％胰酶和1.00％Ⅱ型胶原酶依次消化心肌组织,加入0.1％mM5-Brdu抑制成纤维细胞的生长,混悬液经差速贴壁2h后,以1×106/ml的细胞密度接种于35mm的培养皿中,待心肌细胞生长接近汇合状念及呈现同步搏动时开始实验。
　　 2.建立心肌细胞凋亡模型,模拟低温环境,将心肌细胞放入4℃恒温箱处理1h,然后将心肌细胞在37℃含有5％CO2培养箱继续孵育0h,4h,8h,12h,16h,24h.以各时间点正常培养心肌细胞为对照组。选取Bim蛋白开始表达的时间点,加入PI3K/AKT阻断剂LY294002后2小时再进行低温处理,再次检测相关指标。
　　 3.分别用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,MTS检测细胞存活率。Westernblotting检测不同时间点Bim,PI3K,p-PI3K表达。
　　 结果:
　　 1.低温处理1h后,心肌细胞在0h的凋亡率及乳酸脱氢酶活性均较正常对照组增加(分别为20.01±1.43 vs6.79±1.50,P<0.05；43.30±2.50 vs
　　 18.13±1.57,p<0.05)。随着复温后心肌细胞培养时间延长,细胞凋亡率增加,在24h组达到最高,这与乳酸脱氢酶活性水平变化一致。
　　 2.Bim蛋白在低温处理1h后即开始升高,在继续培养的各时间点,均高于对照组(P<0.05)；这与细胞凋亡率变化相一致,而各时间点对照组间Bim表达无明显变化。
　　 3.加入PI3K/AKT阻断剂LY294002(终浓度25umol/L)行低温处理1小时后,心肌细胞凋亡率较单纯低温处理组组明显升高(P<0.01),Bim在低温+阻断剂组的表达较低温组增高(P<0.05),p-PI3K在低温组表达较阻断剂组和正常对照组增高(P<0.05),而PI3K在各实验组的变化无显著差异。
　　 结论:
　　 低温能够诱导心肌细胞凋亡,而促凋亡蛋白Bim可能参与了低温诱导的心肌细胞凋亡过程,PI3K/AKT信号传导通路在此过程中可能参与了Bim的诱导表达。