苦参碱逆转人胃癌细胞株SGC7901/VCR耐药性的实验研究

摘要

目的:
　　 通过研究中药苦参碱(Matrine)对人胃癌耐药细胞株SGC7901/VCR多药耐药的逆转效应及其机制,来寻找适合人胃癌多药耐药临床治疗的新型多药耐药逆转剂。
　　 方法:
　　 1、将SGC7901/VCR细胞进行实验室条件下的体外培养传代,获得实验所需要细胞数量。
　　 2、以长春新碱(VCR)诱导的人胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR为研究对象,利用MTT比色法研究苦参碱和/或长春新碱对体外培养的人胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR细胞增殖的影响及苦参碱的逆转作用。
　　 3、用Annexin V/PI法经流式细胞仪技术检测细胞凋亡。
　　 4、用间接免疫荧光法经流式细胞仪技术检测多药耐药相关蛋白(MRP)在细胞表达的变化。
　　 结果:
　　 1、体外培养条件的人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR在长春新碱浓度为1ug/ml的细胞培养液中能够正常增殖。在无药培养1月后,再行1ug/ml的长春新碱的培养液培养,发现SGC7901/VCR细胞2.3天后出现全部死亡。
　　 2、MTT比色法法显示苦参碱在0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml浓度条件下分别处理SGC7901/VCR细胞72h后,其生长抑制率依次为10％、15％、32％,且可以逆转SGC7901/VCR对VCR的耐药,呈剂量依赖性,逆转倍数为9.4倍、13.4倍、24.5倍。
　　 3、通过流式细胞仪检测细胞凋亡显示SGC7901/VCR正常凋亡率约为2.57％.在加入0.5ug/ml的VCR后,其凋亡率约为2.96％,与正常凋亡率相比无显著性差异(P>0.05)。苦参碱在0.5mg/ml、1mg/ml终浓度条件下分别处理SGC7901/VCR细胞24h后的凋亡率依次约为3.9％、7.53％,两组与正常凋亡率及加入0.5ug/ml的VCR相比具有显著性差异(P<0.01).而在长春新碱中加入苦参碱在0.5mg/ml、1mg/ml浓度条件下的凋亡率则增加至约为17.33％、30.33％。在0.5ug/ml的VCR中加入0.5mg/ml、1mg/ml苦参碱后,不仅与单纯苦参碱0.5mg/ml、1mg/ml浓度条件下相比,具有显著性差异(P<0.01),且两者之间相比具有显著性差异(P<0.01).
　　 4、用间接免疫荧光法经流式细胞仪技术检测SGC7901/VCR的MRP显示,正常SGC7901/VCR的MRP表达率为36±4.32％.而在使用非细胞毒性剂量0.5mg/ml苦参碱与SGC7901/VCR细胞共同培养24h后,SGC7901/VCR细胞的MRP表达从36％降低为25±3.85％,表达率显著下降(P<0.01)。
　　 结论:
　　 1、引进的人胃癌SGC7901/VCR细胞株具有耐长春新碱的作用,其耐药特性需要在含长春新碱培养液中维持。
　　 2、苦参碱具有对SGC7901/VCR细胞株的杀伤作用,且可逆转其多药耐药性。
　　 3、苦参碱具有可诱导SGC7901/VCR细胞株凋亡的作用,且浓度越高,凋亡率越高.在与VCR协同作用于SGC7901/VCR细胞时,苦参碱具有增强VCR诱导凋亡的作用。
　　 4、苦参碱逆转SGC7901/VCR细胞株的多药耐药与其降低部分细胞的MRP表达有关。