肝复康胶囊研究及对人肝癌细胞系HepG2的影响

摘要

肝复康胶囊系根据肝复康丸经剂型改革(改变提取工艺及剂型)而成的中药胶囊剂。肝复康丸系部颁标准中药成方制剂第7册收载的中药成方制剂，由五味子、太子参、白花蛇舌草三味中药组成。功能为收敛，益气，解毒，降谷丙转氨酶，是治疗肝炎的有效中成药，市场反应良好，用于急、慢性肝炎，早期肝硬化和肝功能不良。但原剂型存在以下不足之处：1、制备工艺落后：由于原剂型为丸剂，药材直接粉碎制成丸剂，其制备工艺非常落后：2、质量控制标准落后：原丸剂质量标准中仅有两个试管反应：3、服用剂量大：由于原丸剂为药材直接粉碎制丸，制剂中含有大量的非药用成分，因而服用剂量大，一次6～9g，患者较难接受。拟将处方中药材经提取后制成胶囊剂，可显著减少非药用成分的摄入，方便患者服用，为临床提供一种治疗肝炎、肝癌且服用方便的中药新药。另外，本研究还从分子细胞生物学、免疫细胞化学探讨了肝复康胶囊抗癌或阻断肝细胞癌变的可能途径，初步阐明了肝复康胶囊治疗肝炎和抗癌的作用机理。主要研究内容和结果如下：
　　 1、提取工艺研究：采用正交试验，以总木脂素的转移率考察醇提工艺，以正丁醇提取物和总皂苷为指标考察煎煮工艺，实验结果表明五味子以5倍量70％乙醇回流提取2次、每次2 h为优，太子参和白花蛇舌草以8倍量水煎煮3次、每次2 h为优。
　　 2、成型工艺研究：以颗粒的流动性、吸湿性、堆密度和崩解时限为指标，考察制剂的处方优劣。得出肝复康胶囊的成型工艺，即取干浸膏，加入20％的淀粉、15％微粉硅胶和5％羧甲淀粉钠，混匀，以80％乙醇制粒，干燥，整粒，填充胶囊。
　　 3、肝复康胶囊质量标准研究：新剂型质量标准研究中对处方中三味药材均建立了薄层定性鉴别，同时采用HPLC建立了制剂中五味子醇甲的含量测定方法；该质量标准能更有效控制产品质量，提高了该产品的质量可控性。
　　 4、肝复康胶囊稳定性研究：通过连续6个月的恒温恒湿加速试验(40℃±2℃、RH75％±5％)和6个月的室温留样试验研究，并与0月比较，结果其外观性状、鉴别、胶囊重差异、崩解时限及含量测定等结果均符合本品质量标准，卫生学检查也符合规定，说明肝复康胶囊在稳定性试验期间基本稳定，因此，有效期暂定为24个月。
　　 5、中药肝复康胶囊对人肝癌细胞系HtepG2的影响：采用MTT比色法测定肝复康胶囊对人肝癌细胞系H epG2细胞增生的影响。用流式细胞仪分析细胞周期、细胞凋亡，观察肝癌细胞的DNA相对含量，分析各时期细胞周期的变化。用免疫细胞化学的方法检测药物作用后诱导凋亡蛋白0mi/HtrA2和Casepase-3的表达。结果表明肝复康胶囊具有较好的抑制HepG2细胞增生的作用，呈现出时间一剂量依赖性：应用肝复康胶囊后HepG2细胞G2期比例升高，G1期和S期细胞比例降低，并使细胞凋亡率增加。