腺苷A2A受体激动剂缓解小鼠DSS结肠炎及机制研究

摘要

背景：
　　溃疡性结肠炎（UC）是炎症性肠病（IBD）的一种，其以结肠及直肠部位出现不受控制的炎症反应为特点。传统治疗不能有效缓解病情及阻止其复发，且可能会引起严重的副作用。因此，我们亟需探索治疗UC的新方法。新近研究显示，激活腺苷A2A受体可发挥抗炎作用及免疫抑制作用，然而，A2A受体调节肠道免疫反应及可能的机制尚待深入研究。
　　目的：
　　探讨腺苷A2A受体激动剂调节葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导小鼠结肠炎肠道炎症反应及可能的机制。
　　方法：
　　将Balb/c小鼠随机分成4组：正常对照组，DSS组，DSS+CGS21680组，DSS+CSC组。自实验第一天开始，给小鼠饮用4％DSS建立急性结肠炎模型。自实验第3天开始，对DSS+CGS21680组、DSS+CSC组小鼠每天分别给予CGS216801mg/kg、CSC2.5mg/kg腹腔注射至第7天。每天观察各组小鼠疾病活动指数（DAI），第8天处死小鼠，取结肠组织行HE染色评估结肠严重程度，免疫组化测定组织中CD68及pNF-κB p65的表达，组织匀浆检测各组小鼠结肠MPO的含量，ELISA检测TNF、IL-1β的表达量。
　　结果：
　　1．DAI评分：第7天各组小鼠DAI评分，DSS+CGS21680组DAI评分（1.57±0.65）明显低于DSS组（3.10±0.47）与DSS+CSC组（3.07±0.21）DAI评分（P<0.05），对照组DAI评分为0，各组与对照组比较均有统计学意义（P<0.05）。
　　2.组织病理学评分：DSS+CGS21680组组织病理学评分为1.80±0.79，明显低于DSS组（3.10±0.74）与DSS+CSC组（3.00±0.82）组织病理学评分（P<0.05）。对照组组织病理学评分为0，各组与对照组比较均有统计学意义（P<0.05）。
　　3．MPO活性：DSS组与DSS+CSC组MPO活性较正常组明显增高（P<0.05），其活性分别为9.91±1.66U/g、10.96±1.28U/g。DSS+CGS21680组 MPO活性（7.72±0.67U/g）明显比DSS组和DSS+CSC组低，具有统计学意义（P<0.05）。
　　4．组织匀浆TNF含量：DSS组与DSS+CSC组TNF表达水平结果分别为270.77±57.55pg/g与265.88±69.35pg/g较正常组明显增高（P<0.05）。DSS+CGS21680组TNF表达水平（138.47±40.46pg/g）明显比DSS组和DSS+CSC组低，具有统计学意义（P<0.05）。
　　5.组织匀浆IL-1β含量：检测各组IL-1β的表达水平，DSS组和DSS+CSC组IL-1β表达水平较正常组明显增高（P<0.05），各组值分别为176.88±55.84pg/g，196.52±47.80pg/g。DSS+CGS21680组IL-1β表达水平（54.71±36.22pg/g）明显比DSS组和DSS+CSC组低，具有统计学意义（P<0.05）。
　　6．结肠组织pNF-κB p65的表达：对照组小鼠结肠粘膜中阳性细胞几乎没有，而DSS组与DSS+CSC组pNF-κB p65阳性细胞数分别为68.34±11.55与70.74±10.74。DSS+CGS21680组pNF-κB p65阳性细胞数明显低于DSS组与DSS+CSC组，只有42.12±12.47，与DSS组或DSS+CSC组比较具有统计学意义（P<0.05）。
　　7．结肠组织CD68的表达：对照组小鼠结肠组织中仅有极少量或基本没有CD68阳性细胞。DSS组及DSS+CSC组CD68阳性细胞数分别为30.56±9.51与33.97±9.18，两组比较无统计学意义（P>0.05）。而DSS+CGS21680组粘膜中CD68阳性细胞数（16.22±6.43）较该两组明显少，与这两组比较有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：
　　腺苷A2A受体的激动剂能缓解小鼠DSS结肠炎肠道炎症反应，机制可能为抑制外周巨噬细胞向肠粘膜的浸润及抑制NF-κB的激活。

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中英文缩略词对照

第1章 引言

第2章 材料与方法

2.1 实验试剂和仪器

2.1.1 主要试剂

2.1.2 主要仪器

2.2 实验对象与分组

2.2.1 实验对象

2.2.2 实验分组

2.3 实验方法

2.3.1 急性DSS结肠炎模型的建立

2.3.2 小鼠结肠炎严重程度

2.3.3 结肠组织髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）活性的测定

2.3.4 ELISA法检测结肠组织细胞因子TNF、IL-1β含量

2.3.5 免疫组织化学原位检测结肠组织pNF-κB p65及CD68的表达

2.4 统计学处理

第3章 结果

3.1 各组小鼠DSS结肠炎的观察

3.1.1 各组小鼠体重

3.1.2 各组小鼠结肠炎DAI评分

3.1.3 各组小鼠结肠外观及长度变化

3.1.4 各组小鼠结肠炎的结肠组织病理学变化

3.2 各组小鼠结肠组织髓过氧化物酶（MPO）活性的测定

3.3 各组小鼠结肠组织中TNF、IL-1β的表达

3.3.1 各组小鼠结肠组织中TNF表达水平

3.3.2 各组小鼠结肠组织中IL-1β表达水平

3.4 各组小鼠结肠组织pNF-κB p65和CD68的表达情况

3.4.1 各组小鼠结肠组织pNF-κB p65的表达

3.4.2 各组小鼠结肠组织CD68的表达：

第4章 讨论

第5章 结论

致谢

参考文献

附图

攻读学位期间的研究成果

综述:腺苷的免疫调节功能

引言

1 腺苷的代谢

2 腺苷的作用机制

3 腺苷与免疫反应

3.1 腺苷与固有免疫系统

3.2 腺苷与适应性免疫系统

4 腺苷与疾病

4.1 腺苷与炎症性肠病

4.2 腺苷与其他疾病

5 结论

参考文献