定点编辑人jmjd3基因的TALEN质粒构建及jmjd3基因敲除对人宫颈癌细胞体外效应观察

摘要

目的：
　　利用TALEN技术构建编辑人jmjd3基因的TALEN质粒，并观察Jmjd3敲除后人宫颈癌细胞体外生长情况。
　　方法：
　　构建编辑人jmjd3基因的TALEN质粒载体（TALEN左臂质粒L1及TALEN右臂质粒R1），经酶切鉴定，测序验证；用TALEN左臂L1、TALEN右臂R1、EGFP荧光质粒共同转染人宫颈癌细胞系Hela，同时设未转染的宫颈癌细胞为空白对照，转染24小时后计算转染效率。随后采用浓度为2ug/ul嘌呤霉素溶液进行筛选至空白对照组细胞全部死亡（>3d)，共转染组细胞继续培养，行RT-PCR检测宫颈癌细胞内jmjd3 mRNA表达水平，MTT检测细胞增殖活力。
　　结果：
　　经酶切鉴定，DNA测序及blast比对分析证实成功构建编辑人jmjd3基因TALEN质粒对；转染后Hela细胞与空白对照组相比，可见质粒共转染组jmjd3 mRNA表达水平明显降低，表达抑制率为（46.5±2.0）％；MTT检测表明质粒共转染组细胞增殖能力明显受到抑制，差异具有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：
　　1、针对人jmjd3基因位点人工构建的TALEN质粒，可实现对人基因组jmjd3基因位点的编辑。
　　2、编辑jmjd3基因可使宫颈癌细胞系Hela细胞增殖能力明显受到抑制，说明jmjd3参与宫颈癌细胞增殖调控。

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中英文缩略词表

第1章 前言

第2章 材料与方法

2.1 菌种

2.2 质粒

2.3 细胞株

2.4 常用软件

2.5 主要仪器

2.6 主要试剂

2.7 主要试剂的配制

2.8 TALEN质粒的构建与测序

2.9 TALEN质粒的编辑效应检测

2.10 统计学处理

第3章 结果

3.1编辑人jmjd3 TALEN质粒的构建

3.2编辑人jmjd3 TALEN质粒酶切鉴定

3.3编辑人jmjd3 TALEN质粒测序

3.4编辑人jmjd3 TALEN质粒blast比对分析

3.5编辑人jmjd3 TALEN质粒电泳鉴定

3.6质粒转染效率检测

3.7药物筛选后细胞数对比

3.8 Hela细胞总RNA电泳结果

3.9 编辑jmjd3后Hela 细胞mRNA表达情况

3.10编辑jmjd3 后Hela细胞增殖情况分析

第4章 讨论

第5章 结论与展望

致谢

参考文献

附图

攻读学位期间的研究成果

综述; 组蛋白去甲基化酶jmjd3研究进展