白果内酯耐缺氧、抗疲劳、抗氧化作用的研究

摘要

研究背景:白果内酯（bilobalide，BB）是从银杏科植物银杏中提取的唯一的倍半萜类物质。银杏叶提取物（EGB）的药理作用研究较多，银杏叶提取物具有抑制心肌收缩力、减慢心率、降低心肌耗氧量、舒张血管和内脏平滑肌，增加冠脉流量，降血压，以及其他药理作用。EGB对心绞痛，心肌梗死、高血压和心律失常等心脑血管性疾病有良好的疗效。研究发现白果内酯可以降低动物血压、减慢心率和增加冠脉流量；白果内酯还对心肌缺血再灌注损伤有显著的保护作用；同时还可以拮抗血小板激活因子引起的血小板异常聚集和血栓形成从而降低血浆粘度和全血粘度；白果内酯对神经也具有保护作用。但白果内酯耐缺氧、抗疲劳、抗氧化等作用目前未见报道。因此，我们主要研究白果内酯的耐缺氧、抗疲劳、抗氧化等作用。通过观察小鼠常压耐缺氧实验、断头后喘息实验，抗异丙肾上腺素引起的心肌耗氧量实验，研究白果内酯的耐缺氧作用；通过观察小鼠负重游泳的存活时间，探究白果内酯抗疲劳作用；通过观察大鼠血清中丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活力，探讨白果内酯的抗氧化作用。
　　目的:本研究拟通过1、观察小鼠常压耐缺氧实验、断头后喘息实验，抗异丙肾上腺素引起的心肌耗氧量实验，阐明白果内酯的耐缺氧作用；2、通过观察小鼠负重游泳的存活时间以及血乳酸、血尿素氮的浓度和肌酸激酶活性、肝糖原和肌糖原的含量。探究白果内酯抗疲劳作用及作用机制；3、通过观察大鼠血清丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活力，探讨白果内酯的抗氧化作用及作用机制。
　　通过本项目的研究为白果内酯挖掘更多的药理作用提供有价值的基础研究资料。
　　方法:
　　1、①耐缺氧实验一：取健康昆明种小鼠30只，每组6只，随机分为溶剂(1％DMSO)对照组，阳性药物（1%普萘洛尔20.0mg/kg）对照组，2.5、5.0、10.0mg/kg的白果内酯组，灌胃给药，给药后25min，将小鼠放入250ml的磨口广口瓶中，密封（瓶内垫有滤纸，用以吸收尿液，每瓶放1只小鼠，瓶口涂以凡士林以防漏气）观察白果内酯对小鼠常压耐缺氧的影响；
　　②耐缺氧实验二：取健康昆明种小鼠40只，每组8只，随机分为溶剂(1%DMSO)对照组，阳性药物（1%普萘洛尔20.0mg/kg）对照组，1.0、2.5、5.0mg/kg白果内酯组，灌胃给药，给药25min后，快速断头，观察白果内酯对小鼠断头呼吸的影响；
　　③耐缺氧实验三：取健康昆明种小鼠36只，每组6只，随机分为模型组、阳性药对照组、溶剂(1%DMSO)对照组、5.0、10.0、20.0mg/kg的白果内酯组。模型的制备：异丙肾上腺素模型组按照15mg/kg剂量给小鼠皮下注射异丙肾上腺素。造模后5min给药，20min后，将小鼠放入250ml的磨口广口瓶中，密封（瓶内垫有滤纸，用以吸收尿液，每瓶放1只小鼠，瓶口涂以凡士林以防漏气）观察小鼠常压耐缺氧的影响，观察白果内酯对小鼠抗异丙肾上腺素的耐缺氧的影响。
　　2、抗疲劳实验：
　　①抗疲劳实验一：取健康昆明种小鼠28只，每组7只，随机分为溶剂(1%DMSO)对照组，2.0、4.0、8.0mg/kg白果内酯组。每日灌胃一次，连续6天，给药后20min，小鼠游泳，水温28℃，每日游泳时间10min。结束给药后次日小鼠负重游泳（2g），观察小鼠游泳力竭时间(力竭判断的标准：小鼠头部沉入水中5 s不能浮出水面)，研究白果内酯对抗疲劳作用的影响。
　　②抗疲劳实验二：结束给药后次日，采血取材，测定血乳酸、血尿素氮的浓度和肌酸激酶活性。研究白果内酯对血乳酸、血尿素氮、肌酸激酶作用的影响。
　　③抗疲劳实验三：结束给药后次日，直接麻醉取材，测定肝糖原与肌糖原含量。研究白果内酯对肝糖原与肌糖原含量的影响。
　　3、抗氧化实验：取健康SD大鼠30只，每组6只，随机分为溶剂（1%DMSO）对照组，VE（50.0mg/kg）阳性对照组，2.0、4.0、8.0mg/kg白果内酯组。每日灌胃给药一次，连续给药8天。末次给药后次日，心脏取血，分离血清。
　　1）测定血清中丙二醛的含量；
　　2）测定血清中超氧化物歧化酶活性；
　　3）测定血清中谷胱甘肽过氧化物酶的活力。
　　研究白果内酯对丙二醛的含量、超氧化物歧化酶活性和谷胱甘肽过氧化物酶的活力的影响以及白果内酯抗氧化作用机制。
　　结果:
　　1、耐缺氧实验：
　　①耐缺氧实验一：与溶剂对照组比较，2.5、5.0、10.0mg/kg的白果内酯均能显著延长昆明种小鼠常压耐缺氧条件下的存活时间(P<0.05；P<0.01)；
　　②耐缺氧实验二：与溶剂对照组比较，2.5、5.0mg/kg的白果内酯均能显著延长昆明种小鼠断头后的喘息时间(P<0.05；P<0.01)；
　　③耐缺氧实验三：与溶剂对照组比较，10.0、20.0mg/kg的白果内酯能显著延长异丙肾上腺素引起的心肌耗氧增加昆明种小鼠常压耐缺氧条件下的存活时间(P<0.05；P<0.01)。
　　说明白果内酯对常压耐缺氧、断头后的喘息、异丙肾上腺素引起的缺氧具有显著的保护作用。
　　2、抗疲劳实验：与溶剂对照组比较，4.0、8.0mg/kg的白果内酯组均能显著延长小鼠游泳存活的时间。
　　与溶剂对照组比较，4.0、8.0mg/kg的白果内酯组均能显著增加小鼠肝糖原和肌糖原含量(P<0.05；P<0.01)，显著减少血尿素氮和乳酸生成(P<0.05；P<0.01)，明显降低小鼠肌酸激酶的活性(P<0.05；P<0.01)，使乳酸脱氢酶活性显著增强。
　　说明白果内酯能对抗游泳引起疲劳，具有明显的抗疲劳作用。
　　3、抗氧化实验：
　　1）与溶剂对照组比较，4.0、8.0mg/kg的白果内酯均能显著降低SD大鼠丙二醛(MDA)的含量(P<0.05；P<0.01)；
　　2）与溶剂对照组比较，4.0、8.0mg/kg的白果内酯均能显著升高超氧化物歧化酶(SOD)活性(P<0.05；P<0.01)；
　　3）与溶剂对照组比较，4.0、8.0mg/kg的白果内酯均能显著升高谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活力(P<0.05；P<0.01)。
　　说明白果内酯具有显著的抗氧化作用。
　　结论：白果内酯具有显著的耐缺氧、抗疲劳和抗氧化等作用。其耐缺氧、抗疲劳和抗氧化等作用的机制可能与增加小鼠肝糖原和肌糖原含量，减少血尿素氮和乳酸生成以及明显降低小鼠肌酸激酶的活性；降低丙二醛的含量，升高超氧化物歧化酶活性，升高谷胱甘肽过氧化物酶活力有关。

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符号说明

第1章 引言

第 2 章 实验材料与仪器

2.1 实验动物

2.2 实验试剂

2.3 实验仪器

第 3 章 实验方法

3.1 试剂的配制

3.2 实验步骤

3.3 统计学处理

第4章 结 果

4.1 白果内酯对小鼠的耐缺氧作用

4.2 白果内酯对小鼠的抗疲劳作用

4.3 白果内酯的抗氧化作用

第5章 讨论

5.1 耐缺氧实验

5.2 抗疲劳实验

5.3 抗氧化实验

第6章 结论与展望

6.1 结论

6.2 展望

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述: 白果内酯药理作用的研究