长链非编码RNAuc.48+小干扰RNA对2型糖尿病大鼠糖尿病神经病理性疼痛的作用研究

摘要

目的：文献报道长非编码RNA(long noncoding RNA, lncRNA)表达水平变化及影响 lncRNA改变的因素与神经系统疾病发病相关。本项目研究长非编码RNAuc.48+小干扰RNA对糖尿病神经病理性疼痛（diabetic neuropathic pain, DNP)大鼠背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)和脊髓(spinal cord, SC)中的降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide, CGRP)和嘌呤受体2X7(purinergic2X7 receptor, P2X7R)介导疼痛中的作用及可能机理，为糖尿病神经病理性疼痛防治提供实验基础和治疗靶点。
　　方法：SD雄性大鼠高糖高脂喂养4周，两次小剂量腹腔注射链脲佐霉素(streptozotocin, STZ)，3天后测得空腹血糖≥11.1mmol/L大鼠为2型糖尿病大鼠。连续测3周机械缩足反射阈值(mechanical withdrawl threshold, MWT)和热缩足反射潜伏期(thermal withdrawl latency, TWL)，测得MWT、TWL值低于基础值的80％以下者为2型糖尿病神经病理性痛大鼠。利用随机分组法，将2型糖尿病神经病理性痛大鼠分为4组(n=36)：(1)正常对照组(Control组)，(2)糖尿病神经病理性痛+生理盐水组(DNP组)，(3)糖尿病神经病理性痛+uc.48+小干扰RNA组(DNP+uc.48+siRNA组)，(4)糖尿病神经病理性痛+uc.48+小干扰RNA阴性对照组(DNP+scramble siRNA组）。鞘内注射lncRNAuc.48+小干扰RNA3天后，观察小干扰对DNP大鼠MWT和TWL阈值的影响，取腰椎L4-6段DRGs和SC，逆转录聚合酶链式反应法(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)、免疫组织化学法(immunohistochemistry, IHC)和蛋白印迹(westen blot, WB)等方法观察DRG和SC中CGRP和P2X7R的表达变化，并用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)方法测定血清中白细胞介素-1β(interleukin, IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor, TNF-α)水平变化和WB方法观察DRG和SC中p38和ERK1/2通路磷酸化情况。
　　结果：建模成功后 DNP组大鼠的 TWL、MWT与正常组相比较显著下降(P<0.01), uc.48+小干扰 RNA组可以显著升高降低的 MWT和 TWL(P<0.01)；RT-PCR、IHC和WB结果表明DNP组、DNP+scramble siRNA组与正常对照组相比，DRGs和SC中的lncRNAuc.48+、CGRP、P2X7以及OX-42或GFAP的表达显著升高(P<0.01)，而DNP+uc.48+siRNA组与DNP组相比显著下降(P<0.01)。DNP组大鼠DRGs和SC中p38和ERK1/2通路磷酸化程度和正常组相比较显著增高，uc.48+小干扰可以显著降低DNP大鼠DRGs和SC中p38和ERK1/2通路磷酸化程度。ELISA结果表明uc.48+小干扰可以显著降低DNP大鼠血清中升高的IL-1β和TNF-α水平(P<0.01)。
　　结论：LncRNAuc.48+涉及到糖尿病神经病理痛大鼠疼痛传递，uc.48+小干扰RNA有可能通过降低DNP大鼠DRGs和SC中CGRP和P2X7的表达对DNP大鼠的痛觉过敏和痛觉异常有一定缓解作用。

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中英文缩略词表

第1章 引言

第2章 材料与方法

2.1 材料

2.2 方法

第3章 结果

3.1 血糖与体重

3.2 Uc.48+siRNA干扰效果实验结果

3.3 Uc.48+siRNA对DNP大鼠机械缩足反射阈值(MWT)的影响

3.4 Uc.48+siRNA对DNP大鼠机械缩足反射阈值(MWT)的影响

3.5 Uc.48+siRNA对DNP大鼠血清中IL-1β 和 TNF-α的影响取大鼠血清，做IL-β和TNF-αELISA检测。

3.6 Uc.48+siRNA对DNP大鼠SC和DRGs中CGRP、P2X7R、uc.48+、GFAP、ox42mRNA表达的影响

3.7 Uc.48+siRNA对DNP大鼠SC和DRGs中CGRP、P2X7R表达的影响

3.8 Uc.48+siRNA对DNP大鼠SC和DRGs中p38和ERK1/2通路磷酸化的影响

第4章 讨论

第5章 结论

致谢

参考文献

综述: P2X4、P2X7受体与疼痛的研究进展