EGFR单抗偶联微管蛋白抑制剂对人肺癌抑制作用的体外研究

摘要

目的：
　　本实验拟从体外研究 EGFR单抗偶联微管蛋白抑制剂（简称抗体药物偶联物、ADC）对人肺癌A549细胞的抑制作用及作用的细胞周期。
　　方法：
　　1、细胞抑制率：运用CCK-8法检测EGFR单抗偶联微管蛋白抑制剂(ADC)、西妥昔单抗、顺铂在不同浓度不同时间对人肺癌A549细胞的体外抑制作用。
　　2、细胞周期检测：A549细胞在EGFR单抗偶联微管蛋白抑制剂（ADC）、西妥昔单抗、顺铂不同浓度药物作用24小时后，使用流式细胞仪检测细胞周期。
　　结果：
　　1、细胞抑制率结果：ADC组在低、中、高浓度对A549细胞均有明显抑制作用，西妥昔单抗组对 A549细胞有一定抑制作用。ADC与西妥昔单抗均为不同浓度时24小时细胞抑制率随着浓度增加而增加，P＜0.05，有统计学意义。48小时低、中浓度抑制率随着浓度增加而增加，P＜0.05。到高浓度时不随时间和剂量的增加而增加，P>0.05，无统计学意义。ADC与西妥昔单抗两药摩尔剂量接近时，两组在24、48小时比较，均为P＜0.01，有显著差异。顺铂组低、中、高浓度对A549细胞均有明显抑制作用。低、中浓度时随着浓度和时间增加而增加，P＜0.05；中浓度与高浓度相同时间比，随着浓度增加，P>0.05。高浓度时随着时间延长抑制率无明显增加，P>0.05。当ADC摩尔剂量约为顺铂的0.01时，24h抑制率 P>0.05，无差异；48h抑制率P＜0.05,ADC作用较顺铂强。提示ADC，西妥昔单抗，顺铂与对照组比较对A549细胞均有抑制作用。在一定剂量范围内ADC与西妥昔单抗、顺铂对A549细胞抑制率均随着浓度和时间的增加而增加， ADC作用明显强于西妥昔单抗。在相同摩尔浓度下ADC作用明显强于顺铂。2、细胞周期结果：ADC在不同浓度组与对照组比较，G2/M期细胞均明显增多， G1和S期细胞均较对照组减少，P＜0.01，有显著差异，提示ADC为G2/M期阻滞。西妥昔单抗不同浓度以G1期细胞为主，G1、S、G2期与对照组比较均无明显差异P>0.05。顺铂组不同浓度细胞各期与对照组比较，G1期细胞明显增多， S、G2期细胞减少，P＜0.05，有统计学意义,提示为G1期阻滞。相同药物不同浓度之间各期细胞比较P>0.05，提示细胞周期的阻滞时期与药物浓度无关。ADC与西妥昔单抗（两药分子量接近）相同摩尔浓度0.0134mmol/L各期比较，P＜0.01，提示 ADC与西妥昔单抗阻滞周期不同。ADC0.0134mmol/L与顺铂1.33 mmol/L（ADC摩尔数约为顺铂的0.01）各期比较，P＜0.01为显著差异，提示ADC与顺铂阻滞周期不同。
　　结论：
　　本实验的抗体药物偶联物（EGFR单抗偶联微管蛋白抑制剂）对人肺癌A549细胞生长有明显抑制作用，抑制作用要强于西妥昔单抗与顺铂。EGFR单抗偶联微管蛋白抑制剂阻滞的细胞周期为G2/M期，与西妥昔单抗与顺铂阻滞周期不同。

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中英文缩略词表

第1章 前言

第2章 实验材料与设备

2.1主要实验试剂材料

2.2主要设备仪器

2.3实验药物与细胞

2.4试剂配制

第3章 实验方法

3.1人肺癌A549细胞培养

3.1.1、细胞的复苏

3.1.2、A549细胞更换新的培养液

3.1.3、A549细胞的传代

3.1.4、A549细胞的冻存

3.2 CCK8实验

3.2.1实验方法

3.2.2 结果处理

3.2.3统计学方法

3.2.4 结果判定

3.3 细胞周期测定

3.3.1 试验方法：

3.3.2结果处理

3.3.3统计学分析

3.3.4 结果判定

第4章 实验结果

4.1 CCK8试验，细胞抑制率结果

4.2 细胞周期结果

第5章 讨论

第6章 结论与展望

6.1 结论

6.2 展望

致谢

参考文献

附图

综述: 西妥昔单抗在肺癌治疗中的研究进展