PPAR-γ对大鼠肾缺血再灌注损伤后肾小管上皮细胞自噬的调控作用

摘要

目的：
　　探讨PPAR-γ激活对大鼠肾缺血再灌注损伤后肾小管上皮细胞自噬活性调控作用。
　　方法：
　　选用SPF级SD雄性大鼠，200-250g，将大鼠分为5组。sham组:仅打开腹腔但不阻断双侧肾蒂血管，观察45min后关闭腹腔，于术前1周给予2ml/(kg?d) DMSO灌胃；DMSO+IRI组（DIR组）：用微型血管夹阻断大鼠双侧肾蒂血管，45min后松开微型血管夹恢复双肾血流，关闭腹腔，于术前1周给予2ml/(kg?d) DMSO灌胃；吡格列酮+IRI组（PIR组）：用微型血管夹阻断大鼠双侧肾蒂血管，45min后松开微型血管夹恢复双肾血流，关闭腹腔，于术前1周给予10mg/(kg?d) Pio灌胃；GW9662+IRI组（GIR组）：用微型血管阻断大鼠双侧肾蒂血管，45min后松开微型血管夹恢复双肾血流，关闭腹腔，于术前24h和12h各于腹腔内注射1mg/kg GW9662；吡格列酮+GW9662+IRI组（PGIR组）：用微型血管夹阻断大鼠双侧肾蒂血管，45min后松开微型血管夹恢复双肾血流，关闭腹腔，于术前1周给予10mg/(kg?d) Pio灌胃，同时于术前24h和12h各于腹腔内注射1mg/kg GW9662，（n=5）。各组大鼠于术后24h采血和收取大鼠肾脏标本，收集大鼠血液用于检测血清肌酐、血尿素氮来判断肾功能，从大鼠腹部切口获取双侧肾脏，行HE染色，在光学显微镜下观察大鼠肾脏病理变化，TUNEL法检测各组大鼠肾脏肾小管上皮细胞的凋亡情况，利用RT-PCR及Western-blot方法，检测肾脏中PPAR-γ的mRNA和蛋白的表达，应用蛋白免疫印迹法（western blot）检测各组大鼠自噬溶酶体相关蛋白LC3和Beclin-1表达变化。
　　结果：
　　（1）血清肌酐、血尿素氮：与sham组相比，其余各组IRI组SCr、BUN均显著升高（P<0.05）。与DIR组相比，PIR组中SCr、BUN降低（P<0.05）， GIR组SCr、BUN变化无统计学意义（P>0.05）；与PIR组比较，PGIR组SCr、BUN升高（P<0.05）。
　　（2）HE染色：与sham组相比，其余各组IRI肾组织病理评分明显升高（P<0.05）；与DIR组相比，PIR组病理评分明显降低（P<0.05），GIR组病理评分无明显差异（P>0.05）；与PIR组相比，PGIR组病理评分上升（P<0.05）。
　　（3）肾小管上皮细胞凋亡的状况：与sham组比较，其余各组IRI组细胞凋亡数明显增加（P<0.05）；与DIR组相比，PIR组细胞凋亡数显著降低（P<0.05）， GIR组细胞凋亡数无明显差异（P>0.05）；与PIR组相比，PGIR组细胞凋亡数显著增加（P<0.05）。
　　（4）PPAR-γPCR表达：与sham组相比，PIR组、PGIR组的PPAR-γ的表达明显增强（P<0.05），DIR组的PPAR-γ的表达无统计学意义（P>0.05），GIR组的PPAR-γ的表达降低（P<0.05）；与DIR相比，PIR组PPAR-γ表达显著增强（P<0.05）；与PIR组相比，PGIR组PPAR-γ表达显著降低（P<0.05）。
　　（5）PPAR-γ、LC3和Beclin-1蛋白表达：与sham组相比，其余各组IRI组LC3和Beclin-1表达均显著增强（P<0.05），而DIR组PPARγ表达变化无统计学意义（P>0.05），PIR组、PGIR组PPARγ表达显著增强（P<0.05），GIR组PPARγ表达显著降低（P<0.05）；与DIR组相比，PIR组PPARγ、LC3和Beclin-1表达显著增强（P<0.05）；与PIR组相比，PGIR组PPARγ、LC3和Beclin-1表达显著降低（P<0.05）。
　　结论：
　　（1）肾缺血再灌注损伤导致大鼠肾功能和肾病理组织学变化，表现为血清肌酐和血尿素氮升高，肾细胞凋亡和坏死增加。
　　（2）吡格列酮激活PPAR-γ通路具有保护肾脏肾缺血再灌注损伤的作用，此作用是通过调节自噬相关蛋白LC3和Beclin-1表达来实现。

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中英缩略词表

第1章 前言

第2章 材料与方法

2.1 主要实验设备及器械

2.2 实验材料

2.3 主要试剂

2.4 主要溶液及试剂配制

2.5 实验技术与方法

第3章 结果

3.1 模型构建的评估

3.2 TUNEL法检测结果

3.3 PPARγPCR检测结果

3.4 Western blot蛋白印迹免疫分析

第4章 讨论

第5章 结论

致谢

参考文献

综述: PPAR-γ对大鼠肾缺血再灌注损伤后肾小管上皮细胞的作用