EAE小鼠脑及脊髓组织中IL-17及c-Maf表达与病程关系的研究

摘要

目的：
　　探讨IL-17及c-Maf在实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimentalautoimmuneencephalomyelitis，EAE）小鼠不同发病时期脑及脊髓组织中的动态变化，进一步探讨IL-17及c-Maf在EAE的发病机制中的作用。
　　方法：
　　按照随机数字法将36只10-12周龄，体重在18-22g之间的雌性C57BL/6小鼠，分为EAE组18只和对照组18只。本研究采用髓鞘少突细胞糖蛋白（myelinoligodendrocyteglycoprotein，MOG）35-55多肽/完全弗氏佐剂（CFA）的方法免疫C57BL/6小鼠制备EAE模型。对照组小鼠仅给予生理盐水注射。每天观察每只小鼠的临床表现，称重并参照评分标准进行神经功能评分。将免疫后第10天记为发病前期，第18天记为发病高峰期，第30天记为缓解期，并在两组中分别取材，记为发病高峰期组和缓解期组。将两组小鼠按不同时期处死后取脑组织做石蜡切片，观察炎症细胞浸润的情况，取脊髓组织做LFB染色，观察脱髓鞘情况。采用逆转录聚合酶链反应（reversetranscription-polymerasechainreaction，RT-PCR）检测各时期两组小鼠脑及脊髓组织中IL-17mRNA及c-MafmRNA含量并进行比较，观察各个时期的动态表达情况。采用SPSS17.0统计软件进行统计分析，计量资料以x±SD表示，所有数据进行方差齐性检验和正态性检验，比较采用t检验，多组间参数比较采用单因素方差分析，计量资料组间比较进行方差分析和q检验。检验水准α=0.05，以P<0.05作为差异显著性指标。
　　结果：
　　1、动物发病情况：EAE组的小鼠均出现临床症状，体重明显下降，平均体重均低于对照组，具有统计学差异（P<0.05）；且EAE组神经功能评分均高于对照组，具有统计学差异（P<0.05）。
　　2、组织病理学观察：
　　2.1HE染色
　　2.1.1发病前期：EAE组中小鼠的脑组织中发现少数单核细胞和淋巴样细胞浸润，未见血管袖套样改变。对照组小鼠的脑组织中无明显上述表现。
　　2.1.2发病高峰期：EAE小鼠的脑组织中出现大量单核细胞和淋巴样细胞浸润和血管袖套样改变。对照组小鼠的脑组织中无明显上述表现。
　　2.1.3缓解期：EAE小鼠的脑组织中单核样细胞和淋巴样细胞减少，血管袖套样改变消失。对照组小鼠的脑组织中无明显上述表现。
　　2.2LFB染色
　　2.2.1发病前期：EAE小鼠的脊髓组织中出现白质疏松。对照组小鼠的脊髓组织中无明显上述表现。
　　2.2.2发病高峰期：EAE小鼠的脊髓组织中可见明显脱髓鞘改变。对照组小鼠的脊髓组织中无明显上述表现。
　　2.2.3缓解期：EAE小鼠的脊髓组织中可见脱髓鞘改变。对照组小鼠的脊髓组织中无明显上述表现。
　　3、脑组织中IL-17mRNA及c-MafmRNA的含量及动态变化
　　3.1脑组织中IL-17mRNA的含量：
　　3.1.1发病前期：EAE组小鼠的脑组织中IL-17mRNA表达比对照组高，具有统计学差异（P<0.05）。
　　3.1.2发病高峰期：EAE组小鼠的脑组织中IL-17mRNA表达明显高于对照组，具有统计学差异（P<0.05）。
　　3.1.3缓解期：EAE组小鼠的脑组织的IL-17mRNA表达高于对照组，具有统计学差异（P<0.05）。
　　3.1.4动态变化：对照组中，IL-17mRNA在各时间点的表达差距不大，没有统计学意义（P>0.05）。EAE组中，IL-17mRNA各时间点表达显示，发病高峰期高于发病前期和缓解期，具有统计学差异（P<0.05）。
　　3.2脑组织中c-MafmRNA的含量：
　　3.2.1发病前期：EAE组的c-MafmRNA表达较对照组高，有统计学差异（P<0.05）。
　　3.2.2发病高峰期：EAE组的c-MafmRNA表达明显高于对照组，具有统计学差异（P<0.05）。
　　3.2.3缓解期：EAE组的c-MafmRNA表达高于对照组，具有统计学差异（P<0.05）。
　　3.2.4动态变化：空白对照组各时间点c-MafmRNA表达差距不大，没有统计学差异（P>0.05）。EAE组各时间点c-MafmRNA表达发病高峰期高于发病前期和缓解期，具有统计学差异（P<0.05）。
　　4、脊髓组织中IL-17mRNA及c-MafmRNA的含量及动态变化
　　4.1脊髓组织中IL-17mRNA的含量：
　　4.1.1发病前期：EAE组的IL-17mRNA表达较对照组高，有统计学差异（P<0.05）。
　　4.1.2发病高峰期：EAE组的IL-17mRNA表达明显高于对照组，具有统计学差异（P<0.05）。
　　4.1.3缓解期：EAE组的IL-17mRNA表达高于对照组，具有统计学差异（P<0.05）。
　　4.1.4动态变化：对照组各时间点IL-17mRNA表达差距不大，没有统计学意差异（P>0.05）。EAE组各时间点IL-17mRNA表达发病高峰期高于发病前期和缓解期，具有统计学差异（P<0.05）。
　　4.2脊髓组织中c-MafmRNA的含量：
　　4.2.1发病前期：EAE组的c-MafmRNA表达较对照组高，有统计学差异（P<0.05）。
　　4.2.2发病高峰期：EAE组的c-MafmRNA表达明显高于对照组，具有统计学差异（P<0.05）。
　　4.2.3缓解期：EAE组的c-MafmRNA表达高于对照组，具有统计学差异（P<0.05）。
　　4.2.4动态变化：空白对照组各时间点c-MafmRNA表达差距不大，没有统计学差异（P>0.05）。EAE组各时间点c-MafmRNA表达发病高峰期高于发病前期和缓解期，具有统计学差异（P<0.05）。
　　结论：
　　随着免疫时间的延长及EAE小鼠的病程进展，IL-17及其重要的调控因子c-Maf的表达水平呈先增高后下降的趋势。IL-17及c-Maf与EAE的发生、发展和缓解存在重要联系。

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缩 略 语

第1章 引言

第2章 材料与方法

2.1 实验动物及分组

2.2试剂

2.3 主要仪器

2.4 手术材料和器械

2.5 动物模型的建立

2.6 动物发病的观察

2.7 取材

2.8 HE染色

2.9 LFB染色

2.10 RT-PCR检测脑组织和脊髓组织中的IL-17和c-Maf的mRNA水平

第3章 结果

3.1 发病总体情况

3.2 病理结果观察

3.3 两组小鼠RT-PCT方法检测IL-17mRNA和c-MafmRNA的表达结果

第4章 讨论

第5章 结论与展望

5.1结论

5.2 展望

致谢

参考文献

附图

攻读学位期间的研究成果

综述:EAE模型的研究进展