脂氧素受体激动剂BML-111抗肝纤维化作用及机制研究

摘要

目的：
　　肝纤维化时大量细胞外基质（extracellular matrix, ECM）沉积，是多种慢性肝脏疾病进展为肝硬化的中间过程。肝纤维化的并发症多，预后差，严重影响患者的生活质量。迄今没有满意的治疗药物，亟待开发新的治疗方案和药物。
　　新近大量研究表明肾素-血管紧张素-醛固酮系统(renin-angiontensin aldosterone-system,RAAS)众多组分，包括血管紧张素转换酶（angiotensin-converting enzyme, ACE），血管紧张素II（angiotensin II, Ang II），血管紧张素II受体1（angiotensin II type1 repector, AT1R），血管紧张素转换酶2（angiotensin-converting enzyme2, ACE2）以及血管紧张素(1-7)（angiotensin-(1-7), Ang-(1-7)）等，在肝纤维化发生发展过程中扮演重要角色。提示RAAS可能是干预肝纤维新的理想靶点之一。
　　脂氧素(Lipoxins)是花生四烯酸的代谢产物，同时具备抗炎、促炎症消退、抗氧化、抗肿瘤、调节增殖与凋亡等多重生物学效应。脂氧素前体及受体在正常肝脏大量表达，其对肝脏疾病的保护效应越来越受到重视。本课题主要从RAAS角度探讨脂氧素抗肝纤维化效应及其作用机制。
　　实验方法：
　　1、复制肝纤维化模型。40只SD雄性大鼠，180-220 g，随机分成4组，每组10只。分组及处理如下：
　　（1）正常对照组：皮下注射橄榄油，剂量1.8 ml/kg。
　　（2）模型组：皮下注射40％CCL4油剂(橄榄油为溶剂)，剂量3 ml/kg，每周2次，共10周。
　　（3）BML-111组：皮下注射Lipoxin受体激动剂BML-111，剂量1 mg/kg，30 min后处理同模型组，每周2次，共10周。
　　（4）BOC-2组：皮下注射Lipoxin受体阻断剂BOC-2，剂量50μg/kg，30 min后处理同BML-111组，每周2次,共10周。
　　2、确证脂氧素的抗肝纤维化效应。
　　（1）HE染色：镜下观察肝组织和细胞的结构形态变化，以及炎症反应程度。
　　（2）Masoon染色：镜下定性观察胶原纤维在肝脏组织内的沉积情况。
　　（3）检测羟脯氨酸（hydroxyproline, Hyp）含量：定量检测胶原纤维的沉积水平。
　　（4）检测血清中谷草转氨酶（aspartate aminotransferase, AST）和谷丙转氨酶（alanine aminotransferase, ALT）)活性：评价肝功能情况。
　　3、探索脂氧素抗肝纤维化的作用机制。
　　（1）检测肝组织中ACE和ACE2的活性。
　　（2）qPCR检测肝组织Ang II、Ang-(1-7)、AT1R、Mas的mRNA表达水平。
　　（3）ELISA法检测血清和肝组织中ACE、ACE2、Ang II、Ang-(1-7)的含量。
　　（4）Western Blot检测肝组织中Ang II、AT1R、Ang-(1-7)、Mas的蛋白含量。
　　结果：
　　1．BML-111减轻CCL4诱导的肝脏损伤，并且抑制炎症反应。
　　2．BML-111减轻CCL4所致的胶原沉积程度。
　　3．BML-111抑制血清中 AST和ALT的活性。
　　4．BML-111减少CCL4诱导的血清和肝组织中 ACE的含量。
　　5．BML-111抑制肝脏组织中ACE的活性。
　　6．BML-111降低CCL4诱导的血清和肝组织中Ang II的含量。
　　7．BML-111抑制CCL4诱导肝组织中Ang II和AT1R的基因和蛋白表达水平。
　　8．BML-111增加肝组织中ACE2的含量和活性。
　　9．BML-111增加肝组织中Ang-(1-7)的含量。
　　10．BML-111上调肝组织中Ang-(1-7)和Mas的基因和蛋白表达水平。
　　结论：
　　脂氧素激动剂BML-111具备抗肝纤维化效应，其抗肝纤维化效应可能与调节ACE-AngII-AT1R轴和ACE2-Ang-(1-7)-Mas轴平衡相关。

目录

声明

中英文缩略词表

第1章 引 言

1.1脂氧素概述

1.2脂氧素与肝脏疾病

1.3 RAAS与肝纤维化

1.4 本实验的研究策略与目的

第2章 材料与方法

2.1 材料

2.2 方法

第3章 实验结果

3.1 BML-111对肝脏大体的影响

3.2 BML-111抑制CCL4所致的炎症细胞浸润和肝脏损伤

3.3 BML-111抑制CCL4诱导胶原纤维沉积

3.4 BML-111降低肝脏组织Hyp含量

3.5 BML-111对AST和ALT活性的影响

3.6 BML-111抑制CCL4诱导ACE表达

3.7 BML-111对肝组织ACE活性的影响

3.8 BML-111抑制CCL4诱导Ang II的mRNA表达水平

3.9 BML-111抑制CCL4诱导Ang II表达

3.10 BML-111抑制CCL4诱导AT1R的mRNA表达水平

3.11 BML-111抑制CCL4诱导Ang II和AT1R表达

3.12 BML-111增加肝脏组织中ACE2的含量

3.13 BML-111对肝组织ACE2活性的影响

3.14 BML-111对肝组织ACE2和ACE活性比值的影响

3.15 BML-111促进CCL4诱导Ang-(1-7)的mRNA表达

3.16 BML-111增加肝脏组织Ang-(1-7)的含量

3.17 BML-111促进CCL4诱导Mas的mRNA表达

3.18 BML-111促进 CCL4诱导Ang-(1-7)和Mas表达

第4章 讨论

第5章 结论

攻读学位期间的研究成果

致谢

参考文献

综述:RAAS与肝纤维化的研究进展