声明
中英文缩略表
第1章 引言
1.1心肌纤维化
1.2 TGF-β1与心肌纤维化
1.3 miR-21通路与心肌保护作用
1.4 Notch信号通路在心脏中的作用
1.5 Jagged1在心脏中的概述
1.6 以Jagged1为切入点，研究miR-21信号通路在心肌纤维化中的作用
第2章 miR-21促进TGF-β1诱导的心肌纤维化
2.1 材料
2.1.1 细胞及菌株
2.1.2 腺病毒载体系统
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要仪器
2.1.5 引物的设计与合成
2.2 方法
2.2.1 原代大鼠心肌成纤维细胞的分离与培养
2.2.2重组腺病毒构建
2.2.3 TransWell法检测细胞迁移/侵袭能力
2.2.4 Cell Counting Kit-8试验
2.2.5 Western Blotting
2.2.6 RNA提取、反转录与QPCR
2.2.7 统计学分析
2.3 结果
2.3.1心肌纤维化诱导后miR-21表达升高
2.3.2 降低心脏成纤维细胞miR-21活性，心脏成纤维细胞增殖能力受损
2.3.3降低心脏成纤维细胞miR-21活性，心脏成纤维细胞侵袭能力减弱
2.3.4降低心脏成纤维细胞miR-21活性，抑制CMT
2.3.5降低心脏成纤维细胞miR-21活性，抑制TGF-β1诱导的心脏成纤维细胞增殖性能
2.3.6降低心脏成纤维细胞miR-21活性，抑制TGF-β1诱导的心脏成纤维细胞侵袭性能
2.3.7 降低心脏成纤维细胞miR-21活性，抑制TGF-β1诱导的CMT
2.4 讨论
2.4.1 miR-21与Jagged1之间的联系
2.4.2 miR-21促进大鼠CFs的CMT
2.4.3 miR-21介导TGF-?1对CFs的生物学效应
2.4.4 心肌成纤维化细胞的标志物
第3章 miR-21靶向作用于Jagged1，促进心肌纤维化
3.1 材料
3.1.1 细胞
3.1.2 主要试剂
3.1.3主要仪器
3.2 方法
3.2.1 原代心肌成纤维细胞的培养
3.2.2 重组腺病毒构建
3.2.3 qPCR
3.2.4 Luciferase验证实验
3.2.5 CCK8和TransWell法检测细胞迁移和侵袭能力
3.2.6 WesternBlotting法检测各个蛋白的表达情况的影响
3.2.7统计学分析
3.3 结果
3.3.1miR-21与Jagged1 3’-UTR结合
3.3.2降低心脏成纤维细胞miR-21活性，Jagged1表达升高
3.3.3 降低心脏成纤维细胞miR-21活性，解除TGF-β1对Jagged1的抑制效应
3.3.4 Jagged1干扰与miR-21抑制剂调控心脏成纤维细胞Jagged1表达（蛋白水平、RNA水平）
3.3.5 降低Jagged1表达，解除了miR-21抑制剂对心脏成纤维细胞增殖性能的抑制
3.3.6 降低Jagged1表达，解除了miR-21抑制剂对心脏成纤维细胞侵袭性能的抑制
3.3.7 降低Jagged1表达，解除了miR-21抑制剂对CMT的抑制
3.4 讨论
3.4.1 miR-21介导肌成纤维细胞相关标记蛋白的表达
3.4.2 miR-21调控肌成纤维细胞的增殖和侵袭现象
3.4.3 miR-21通过Jagged1介导TGF-?1诱导的大鼠CMT
3.4.4 miR-21与Jagged1通路相互整合在心肌成纤维细胞中的作用
3.4.5 TGF-?1诱导CMT是通过miR-21靶向Jagged1介导的
第4章 体内验证miR-21促进心肌纤维化
4.1 材料
4.1.1 实验动物
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要仪器
4.2 方法
4.2.1构建Sprague Dawley大鼠心力衰竭模型
4.2.2 Sprague Dawley大鼠腺病毒感染
4.2.3 心功能的评价
4.2.4 Masson染色和超声检查
4.2.5统计学分析
4.3 结果
4.3.1 马森染色检测心肌纤维化
4.3.2 miR-21靶向作用Jagged1对左心功能的影响
4.4 讨论
4.4.1 miR-21在体内促进心肌纤维化
4.4.2 miR-21通路与Jagged1通路在体内拮抗性地调节心肌纤维化
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述miR-21介导心肌纤维化的研究进展
