高频振荡通气联合骨髓间充质干细胞移植对急性呼吸窘迫综合征保护作用的实验研究

摘要

目的：建立内毒素气管内滴注诱发的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)模型兔，采用高频振荡通气(HFOV)联合骨髓间充质干细胞移植(MSCs)治疗，探讨该方案对ARDS兔的保护作用。 方法：家兔34只，2只用于制备骨髓间充质干细胞，全骨髓培养法体外培养兔MSCs，传至第3代备用。剩余32只家兔通过向气管内滴注内毒素（其主要致病成分为脂多糖LPS）建立ARDS致伤模型后，按完全随机的方法分为四组，每组8只。其中A组为ARDS对照组、B组为HFOV组、C组为MSCs移植组、D组为HFOV+MSCs移植组。分别在干预后2、6及24 h采集股动脉血，进行血气分析。将动物24 h后予以处死，用生理盐水灌洗肺组织，收集灌洗液，检测BALF中性粒细胞数目及蛋白含量；取左肺下叶称重量后，计算湿质量／干质量比值(W／D)；右肺取标本，行病理学检查。 结果：1.气管内注入LPS后观察模型组实验兔均出现了呼吸急促窘迫，烦躁，四肢发绀。正常对照组在整个实验过程当中Pa O2、Pa O2/Fi O2和 Pa CO2变化不明显；模型兔在经气管内注入LPS后Pa O2、Pa O2/Fi O2和 PaCO2明显下降，始终显著低于正常对照组（p<0.05）；表明ARDS模型复制成功； 2.动脉血气变化：HFOV+MSCs组 PaO2在三个时间均明显高于 ARDS组(P<0.05)，与MSCs组及HFOV组比较，在24h时间点氧分压差异均有统计学意义(P<0.05)；且在24 h时间点PaCO2数值上，HFOV+MSCs组明显低于其余三组(P<0.05)； 3.肺组织湿/干比，支气管肺泡灌洗液：与其余三组分别比较， HFOV+MSCs组24 h肺组织W／D、BALF中性粒细胞数目及蛋白含量显著降低(P<0.05)； 4.肺组织病理学改变： A组肺组织结构损伤明显，肺泡结构消失间隔增厚，肺泡腔可见渗出、出血及水肿；B组肺组织炎症细胞浸润减少，肺泡内出血渗出液明显减少，大部分肺泡正常；C组仅见散在脱落细胞，炎症细胞浸润减轻，肺泡结构相对完整，肺泡壁无增厚，肺泡腔内炎性渗出和出血明显减轻；D组肺泡结构完整，炎症细胞浸润明显减轻，可见少量肺泡内轻度红色渗出，损伤最轻。 结论：1.将LPS（2mg/kg）气管内注入可以复制 ARDS动物模型。 2. HFOV联合MSCs可以明显改善肺组织的气体交换功能，减轻炎症反应及肺组织损伤，从而对LPS诱发的ARDS兔起到一定的保护作用，优于单一方法，具有协同作用。

目录

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中英文缩略词表

第1章 前言

第2章 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 实验动物

2.1.2 实验仪器

2.1.3 实验试剂

2.1.4 主要试剂的配制

2.2 实验方法

2.2.1 兔MSCs的提取、培养、传代

2.2.2 气管内注入内毒素建立急性肺损伤兔模型

2.2.3 随机分组

2.2.4 动物处理：

2.2.5 相关治疗效果指标的检测

2.2.6 统计学方法

第3章 结果

3.1 MSCs的形态学观察

3.2 ARDS模型建立

3.3 血气分析

3.4 肺组织W／D、支气管肺泡灌洗液中性粒细胞数目及蛋白含量检测

3.4.1 24h后肺组织湿干比

3.4.2 24h后支气管肺泡灌洗液中性粒细胞数目

3.4.3 24h后支气管肺泡灌洗液蛋白含量

3.5 肺组织病理学改变

第4章 讨论

第5章 结论与展望

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述: 高频振荡通气联合骨髓间充质干细胞治疗急性肺损伤的研究进展