CacyBP/SIP过表达对卵巢子宫内膜异位症在位内膜间质细胞生物学功能的影响

摘要

目的： 探讨CacyBP/SIP过表达对卵巢子宫内膜异位症(Ovarian endometriosis， OEMs)在位内膜间质细胞生物学功能的影响。 方法： 1、体外提取卵巢子宫内膜异位症患者在位内膜间质细胞，使用重组CacyBP/SIP慢病毒转染细胞之后检测病毒转染结果； 2、实验分3组。实验组（Lv-hCacyBP/SIP group）：表达CacyBP/SIP重组慢病毒Lv-hCacyBP/SIP处理在位内膜间质细胞；慢病毒阴性对照组（Lv-control group）：慢病毒载体处理在位内膜间质细胞；空白对照组（untreated group）：细胞无处理； 3、CCK-8法检测细胞增殖能力； 4、Transwell检测细胞迁移和侵袭能力； 5、流式细胞仪技术检测细胞凋亡情况。 结果： 1、体外成功分离培养卵巢子宫内膜异位症患者在位内膜间质细胞； 2、成功构建重组慢病毒，应用Western-Blot检测转染后各组实验细胞中CacyBP/SIP表达量：Lv-hCacyBP/SIP group(0.676±0.031)， Lv-control group(0.251±0.001)，两组比较，差异有统计学意义(t=21.231，P=0<0.000)；Lv-control group(0.251±0.001)，untreated group(0.250±0.007)，两组比较，差异无统计学意义(t=0.109，P=0.921)； 3、CCK-8法检测细胞增殖实验结果表明：转染24h后，Lv-hCacyBP/SIP group的A值(0.247±0.007)与Lv-control group的A值(0.260±0.004)比较，差异无统计学意义(t=2.641，P=0.057)；Lv-control group的A值(0.260±0.004)与untreated group的A值(0.257±0.006)比较，差异无统计学意义(t=0.741，P=0.500)。转染48h之后，所有Lv-CacyBP/SIP group的A值与Lv-control group的A值比较，差异有统计学意义(P<0.05)； Lv-control group的 A值与 untreated group(0.379±0.009)的A值比较，差异无统计学意义(P>0.05)； 4、Transwell检测细胞迁移能力：Lv-hCacyBP/SIP group细胞迁移数(134±21.5)与 Lv-control group细胞迁移数(224±12.0)比较，差异有统计学意义(t=6.338， P=0.003)；Lv-control group细胞迁移数(224±12.0)与untreated group细胞迁移数(226±15.2)比较，差异无统计学意义(t=0.207，P=0.846)； 5、Transwell检测细胞侵袭能力：Lv-hCacyBP/SIP group细胞穿膜数(92.33±6.8)与Lv-control group细胞穿膜数(128.67±4.7)比较，差异有统计学意义(t=5.713，P=0.029)；Lv-control group细胞穿膜数(128.67±4.7)与untreated group细胞穿膜数(125.33±10.1)比较，差异无统计学意义(t=0.459，P=0.691)； 6、流式细胞仪技术检测细胞凋亡：Lv-hCacyBP/SIP group细胞凋亡率(8.066±2.85)%与Lv-control group细胞凋亡率(8.865±0.03)%比较，差异无统计学意义(t=0.481，P=0.677)；Lv-control group细胞凋亡率(8.865±0.03)%与untreated group细胞凋亡率(8.433±1.48)%比较，差异无统计学意义(t=0.490，P=0.650)。 结论： CacyBP/SIP过表达能抑制OEMs在位间质细胞增殖、迁移及侵袭能力，但对细胞凋亡无明显影响。

目录

声明

第1章 引言

第2章 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 细胞来源

2.1.2 主要试剂

2.1.3 实验室主要仪器和设备

2.1.4主要液体配制

2.2 实验步骤

2.2.1 子宫内膜间质细胞的体外提取及培养

2.2.2 子宫内膜间质细胞鉴定

2.2.3 重组慢病毒CacyBP/SIP转染细胞

2.2.4 Western-Blot检测各组实验细胞中CacyBP/SIP蛋白表达

2.2.5 CCK-8法检测细胞增殖实验

2.2.6细胞迁移实验

2.2.7细胞侵袭实验

2.2.8细胞凋亡实验

2.3 统计学处理

第3章 结果

3.1 子宫内膜间质细胞鉴定情况

3.2荧光显微镜下在位内膜间质细胞转染效果

3.3 各组细胞中CacyBP/SIP蛋白的表达情况

3.4 过表达CacyBP/SIP对OEMs在位子宫内膜间质细胞增殖能力的影响

3.5 过表达CacyBP/SIP对OEMs在位子宫内膜间质细胞迁移能力的影响

3.6 过表达CacyBP/SIP对OEMs在位子宫内膜间质细胞侵袭能力的影响

3.7 过表达CacyBP/SIP对OEMs在位子宫内膜间质细胞凋亡的影响

第4章 讨论

第5章 结论与展望

5.1 结论

5.2 展望

致谢

参考文献

综述: 钙周期素结合蛋白在肿瘤中作用的研究进展